子宮內(nèi)膜異位癥miRNA表達譜的變化及相關(guān)機制研究.pdf

1、第一章:MicroRNA的重要調(diào)節(jié)者Dicer與Drosha在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性研究
　　 目的:研究Dicer和Drosha在子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位組織中的表達及其臨床意義。
　　 方法:利用熒光定量PCR和western blot檢測在位和異位子宮內(nèi)膜組織中Dicer和Drosha的表達差異;體外培養(yǎng)在位子宮內(nèi)膜組織，采用siRNA干擾Dicer和Drosha，比較未干擾組與干擾對照組

2、之間子宮內(nèi)膜細胞的增殖差異，并用流式檢測細胞凋亡情況;ELISA檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的表達情況;western blot檢測凋亡抑制蛋白bcl-2和促凋亡蛋白bax的表達變化。
　　 結(jié)果:1.異位子宮內(nèi)膜組織中的Dicer和Drosha的表達低于在位子宮內(nèi)膜組織。
　　 2.干擾Dicer和Drosha后能夠促進在位內(nèi)膜細胞的增殖，抑制細胞凋亡。
　　 3.干擾Dicer和Drosha后能夠上

3、調(diào)在位子宮內(nèi)膜細胞中TGF-β1的表達;增加凋亡抑制蛋白bcl-2的表達，減少促凋亡蛋白Bax的表達。
　　 結(jié)論:miRNA的重要調(diào)節(jié)者Dicer和Drosha可以影響TGF-β1及bcl2/bax的表達進而影響細胞的增殖和凋亡，從而參與了子宮內(nèi)膜異位癥的形成.
　　 第二章:MicroRNA在子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜中的表達差異及其對應靶基因的篩選。
　　 目的:研究子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜組

4、織中miRNA基因表達的差異，從分子水平探討子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制。
　　 方法:采用基因芯片技術(shù)分析子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜組織及異位內(nèi)膜組織標本，篩選出兩者之間的差異miRNA，對差異的miRNA進行靶基因預測以及對調(diào)節(jié)靶基因的miRNA頻數(shù)做相關(guān)統(tǒng)計，然后將差異miRNA所對應的靶基因進行功能分類，使用數(shù)據(jù)庫分析這些靶基因可能參與的信號通路，構(gòu)建出MicroRNA-Gene的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，利用網(wǎng)絡(luò)生物學和圖論的方法對網(wǎng)絡(luò)

5、進行分析，篩選出網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵的miRNA和被調(diào)控的靶基因。
　　 結(jié)果:1.通過miRNA芯片分析，以Pval＜0.05為有效基因，ratio＞2為上調(diào)標準，ratio＜0.5為下調(diào)標準，篩選出以hsa-miR-202為代表的12個表達上調(diào)的miRNA，以hsa-miR-33b為代表的39個表達下調(diào)miRNA。
　　 2.通過在線軟件分別預測其上調(diào)和下調(diào)差異的miRNA的靶基因，再通過差異靶基因的GO功能分析，發(fā)現(xiàn)下調(diào)差異

6、的miRNA的靶基因中以SMC1A等為代表，其在細胞進程、生物過程和生物調(diào)節(jié)等生物學功能上富集;上調(diào)差異的靶基因中以CACNA2D3為代表，其在細胞進程、生物過程和代謝過程等生物學功能上富集。
　　 3.通過分析差異miRNA的靶基因可能影響的pathway，發(fā)現(xiàn)下調(diào)差異的miRNA的靶基因主要集中在卵母細胞減速分裂(OocyteMeiosis)和腫瘤發(fā)生等信號通路上;發(fā)現(xiàn)上調(diào)差異的miRNA的靶基因主要集中在MAPK和腫瘤發(fā)生

7、等信號通路上。
　　 4.構(gòu)建了miRNA與靶基因的調(diào)控網(wǎng)路圖，為進一步研究其差異miRNA的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 結(jié)論:hsa-miR-202、hsa-miR-508-3p等12個miRNA在異位內(nèi)膜中表達上調(diào)， hsa-miR-33b、hsa-miR-34b等39個miRNA表達下調(diào)，這些差異的miRNA調(diào)控的靶基因主要參與調(diào)節(jié)代謝以及基因轉(zhuǎn)錄等過程，進而主要影響MAPK、Oocyte Meiosis以及腫瘤發(fā)生等