JNK介導(dǎo)的腦缺血性神經(jīng)元凋亡下游信號通路及其調(diào)控機制的研究.pdf

1、大量研究表明腦缺血再灌注可以激活JNK，而且JNK激活在局灶和全腦缺血介導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡過程中發(fā)揮重要作用。但是，腦缺血誘導(dǎo)JNK激活的下游凋亡信號通路還有待進(jìn)一步闡明。本文采用SD大鼠四動脈結(jié)扎全腦缺血模型，并利用含有GluR6羧基末端九個氨基酸的融合肽Tat-lGluR6-9c、JNK小分子抑制劑、PTEN抑制劑和PI3K特異性抑制劑，探討了腦缺血GluR6介導(dǎo)的JNK激活的下游神經(jīng)元凋亡信號通路以及Akt對下游凋亡通路的調(diào)控機制。

2、 1．腦缺血GluR6介導(dǎo)的JNK激活下游神經(jīng)元凋亡信號通路 為了研究腦缺血KA受體亞基GluR6介導(dǎo)的JNK激活下游神經(jīng)元凋亡信號通路，我們采用SD大鼠四動脈結(jié)扎全腦缺血模型，于缺血前40分鐘腦室注射Tat-G1uR6-9c，以免疫沉淀、免疫印跡和免疫組織化學(xué)方法研究蛋白間的相互結(jié)合及蛋白活性的變化。結(jié)果顯示腦缺血／再灌注過程中，Tat-GluR6-9c一方面抑制了JNK的底物c-Jun的磷酸化以及隨后引起的Fas-L

3、表達(dá)的上調(diào)，另一方面還抑制了JNK胞漿底物14-3-3的磷酸化，減少了Bax從14-3-3／Bax二聚體上分離轉(zhuǎn)位到線粒體以及線粒體內(nèi)細(xì)胞色素c的釋放，最終抑制了caspase-3的激活。我們的結(jié)果提示含有GluR6的KA受體介導(dǎo)的JNK激活最終是通過死亡受體通路和線粒體通路參與腦缺血／再灌注誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡的。 2．Akt1和JNK1/2介導(dǎo)的Bad磷酸化在缺血性腦損傷中起相反作用 為了研究Aktl和JNKl/2介

4、導(dǎo)的Bad通路在腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡中的作用，我們采用SD大鼠四動脈結(jié)扎全腦缺血模型，于缺血前20分鐘腦室注射SP600125或LY294002，或缺血前分五次腹腔注射bpV(pic)，用免疫沉淀、免疫印跡和組織學(xué)方法檢測胞漿和線粒體中蛋白激酶、蛋白表達(dá)以及蛋白間相互作用的變化。結(jié)果顯示JNK抑制劑SP600125抑制了腦缺血/再灌注海馬CAl區(qū)神經(jīng)元Bad(S128)的磷酸化，而對Bad(S136)磷酸化沒有影響，但增加

5、了p-Bad(S136)與14-3-3的結(jié)合，減少了Bad與Bcl-Xl的結(jié)合，明顯抑制了線粒體中細(xì)胞色素C的釋放和caspase-3的激活，促進(jìn)了神經(jīng)元的存活；PTEN抑制劑bpV(pic)激活了Aktl，促進(jìn)了Bad(S136)的磷酸化，抑制了JNKI/2和Bad(S128)的激活，增加了腦缺血復(fù)灌后海馬CAl區(qū)p-Bad(S136)與14-3-3的結(jié)合，減少了Bad與Bcl-Xl的結(jié)合，抑NT線粒體中細(xì)胞色素C的釋放和caspas

6、e-3的激活，保護(hù)神經(jīng)元免受缺血損傷，而P13K特異性抑制劑LY294002可以逆轉(zhuǎn)bpV(pic)的上述作用。我們的結(jié)果提示Aktl和JNKl/2對Bad兩個不同絲氨酸位點的磷酸化在缺血神經(jīng)元的損傷中起到了相反的作用。 綜上所述，腦缺血GluR6介導(dǎo)了JNK的激活，并進(jìn)一步通過死亡受體通路和線粒體通路，最終導(dǎo)致海馬CAl區(qū)神經(jīng)元凋亡；JNKl/2磷酸化Bad(S128)促進(jìn)了Bad介導(dǎo)的凋亡，而Aktl磷酸化Bad(S136)