臍血干細胞移植對帕金森大鼠旋轉(zhuǎn)行為以及紋狀體多巴胺含量的影響.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文臍血干細胞移植對帕金森大鼠旋轉(zhuǎn)行為以及紋狀體多巴胺含量的影響姓名：樊志剛申請學位級別：碩士專業(yè)：生理學指導教師：邢瑩20060520鄭州大學2006年壩士學位論文臍血十細胞移植對帕金森人鼠旋轉(zhuǎn)行為以發(fā)紋狀體多巴胺含量的蟛響本實驗的研究目的是在分離和培養(yǎng)臍血Mscs的基礎上，觀察Mscs移植對帕金森大鼠旋轉(zhuǎn)行為和紋狀體多巴胺含量的影響，以此來探討細胞替代治療PD的可行性和可能機制，為于細胞治療神經(jīng)退行性疾病奠定基礎。方

2、法1采用健康正常分娩產(chǎn)婦或剖富產(chǎn)婦志愿捐獻的臍血，用PBs(phosphate—buf傳redsalineDH74)進行1：l稀釋，密度梯度離心分離單個核細胞(mononuclearcells，MNCs)，PBs洗滌2次后重懸于含15％胎牛血清的H—DMEM中，以1108／m1接種于50ml培養(yǎng)瓶中，7天后換液，貼壁細胞即為MSCs。以后每隔4—5天全量換液。長至80％融合后用O25％胰酶和002％的EDTA混合液消化傳代。2取健康雌性

3、sD大鼠(體重180一220克)，10％水合氯醛(O35m1／1009)腹腔注射麻醉后，固定予立體定位儀上，以前囟為零點，確定右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束(medialforebrainbundleMFB)：前囟后37mm，矢狀縫右側(cè)17mm，顱骨下81Ⅲm和右側(cè)腹側(cè)區(qū)(vent飽ltegm驢talarea，VTA)：前囟后44mm，矢狀縫右側(cè)12mm，顱骨下81姍兩坐標。每點用微量進樣器注射6一OHDA15肛g(溶于5肛1含質(zhì)量分數(shù)為O2％抗壞血酸

4、的生理鹽水中)，注射速度1肛1／min，注射完畢后留針5min，緩慢退針。2周后用阿樸嗎啡(apomorphine，APO)腹腔注射(1omg／kg)以誘發(fā)旋轉(zhuǎn)試驗，平均每分鐘超過7圈作為成功PD模型。3第三代MSCs，避光用Hoechst33258(10腿／m1)標記1h，然后細胞計數(shù)調(diào)整密度為10106／111，立即進行細胞移植。定位右側(cè)紋狀體移植點：前囟前1Omm，矢狀縫右3Omm，顱骨下5Omm；前囟前10mm，矢狀縫右3Omm

5、，顱骨下7Omm。實驗組每點用微量注射器緩慢注射5肛l溶于PBs的Mscs，注射速度1“l(fā)／min，注射完畢后留針5min，緩慢退針。對照組按上述同樣方法和坐標，注入同樣體積的PBs。4移植后每周一次用AP0(10mg／kg)腹腔注射檢測PD癥狀，并且在2周，4周，8周末處死動物，用4％多聚甲醛灌注取腦j30％蔗糖浸泡后作冰凍切片。用熒光顯微鏡觀察MsCs的存活，遷移。同時用免疫熒光雙標組織化學的方法檢測NsE，GFAP，TH和突觸素的