呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎與IL-4、IL-4Rα、IL-10及IFN-γ基因多態(tài)性的相關(guān)性.pdf

1、目的：1.研究Th1/Th2細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白介素-4受體α鏈(IL-4Rα)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)和干擾索-<,γ>(1NF-<,γ>)基因多態(tài)性在溫州地區(qū)兒章中的分布特征:2.探討上述細(xì)胞因子及受體基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒(RSV)毛細(xì)支氣管炎疾病易感性、病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性,3.觀察lL-4、IL-4Rα、IL-10和lNF-<,γ>基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎患兒血清總IgE和鼻咽分泌物(NPS

2、)中相應(yīng)細(xì)胞因子及受體水平的關(guān)系. 方法：1.病人組系2005年12月-2006年3月首次入住溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒章醫(yī)院呼吸科病房,臨床診斷毛細(xì)支氣管炎,經(jīng)直接免疫熒光法檢測(cè)NPS中RSV抗原確診為RSV感染的患兒,共130例,年齡1～24月,平均7.04±4.59月,均為漢族,按臨床癥狀分輕度組和中重度組.選取108例健康體檢兒章作為對(duì)照組,均無(wú)毛細(xì)支氣管炎病史,既往無(wú)特應(yīng)性疾病史,亦無(wú)家族特應(yīng)性疾病史:2.以聚合酶鏈反應(yīng)-限

3、制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)(PCR-RFLP)檢測(cè)130例病人組和108例對(duì)照組兒章IL-4/C-589T、C-33T位點(diǎn)和IL-4Rα/150V、Q576R.位點(diǎn)基因多念性;3.采用DNA測(cè)序法檢測(cè)114例病人組和90例對(duì)照組兒章IL-10/T-819C、A-1082G和INF-<,γ>/A+874T位點(diǎn)基因多念性;4.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定病人組NPS中IL-4、IL-4R、IL-10和INF-<,γ>的水平;5.采用化學(xué)

4、發(fā)光法測(cè)定病人組血清總IgE水平. 結(jié)果：1.IL-4/C-589T位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組均發(fā)現(xiàn)IL-4/C-589T位點(diǎn)基因多態(tài)性,但僅見(jiàn)TT和CT2種基因型,以TT純合子基因型為主,其中病人組IL-4/-589位點(diǎn)TT、CT基因型頻率分別為94.6﹪、5.4﹪,T、C等位基因頻率分別為97.3﹪、2.7﹪:對(duì)照組TT、CT基因型頻率分別為76.9﹪、23.1﹪,T、C等位基因頻率分別為88.

5、4﹪、11.6﹪.病人組TT基因型和T等位基因頻率均顯著高于對(duì)照組(x<'2>=15.995、14.842,P均<0.01),而且T等位基因攜帶者患RSV毛細(xì)支氣管炎的危險(xiǎn)性為C等位基因攜帶者的4.73倍(OR=4.73,P=0.000).但2種基因型間NPS中IL-4及血清總IgE水平差異均無(wú)顯著性(Z=0.515和t=0.260,P均>0.05).IL-4/-589位點(diǎn)突變?cè)谳p度和中重度RSV毛細(xì)支氣管炎患兒?jiǎn)柕牟町愐酂o(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、x<'2>=0.024,P>0.05). 2.IL-4/C-33T位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組IL-4啟動(dòng)子區(qū)C-33T位點(diǎn)可見(jiàn)TT、CT和CC 3種基因型,均以TT純合子基因型所占比例較高.病人組IL-4/-33位點(diǎn)TT、CT和CC基因型頻率分別為66.9﹪、26.9﹪和6.2﹪,對(duì)照組分別為TT 69.4﹪、CT 26.9﹪、CC 3.7﹪,兩組差異無(wú)顯著性(x<'2>=0.758,P>0.05)

7、:病人組T、C等位基因頻率分別為80.3﹪、19.7﹪,對(duì)照組分別為T 82.9﹪、C 17.1﹪,兩組差異亦無(wú)顯著性(x<'2>=0.073,P>0.05;OR=0.847,P>0.05).病人組中IL-4/-33位點(diǎn)TT、CT和CC 3種基因型間NPS中IL-4及血清總IgE水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=0.103和F=0.529,P均>0.05).此外,3種基因型在輕度組和中重度組間的差異亦無(wú)顯著性(經(jīng)<'2>=0.825,P>0.

8、05). 3.IL-4Ra/150V位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組IL-4Rα/150V位點(diǎn)均可見(jiàn)Ⅱ、Ⅳ和VV 3種基因型,以Ⅳ雜合子基因型所占比例較高.病人組IL-4Rα/150V位點(diǎn)Ⅱ、Ⅳ和VV基因型頻率分別為24.6﹪、51.5﹪和23.9﹪,對(duì)照組分別為Ⅱ 27.8﹪、Ⅳ 40.7﹪和VV 31.5﹪,兩組差異無(wú)顯著性(x<'2>=2.960,P>0.05);病人組Ⅰ、Ⅴ等位基因頻率分別為50.

9、4﹪、49.6﹪,對(duì)照組為Ⅰ、Ⅴ等位基因頻率分別為48.1﹪、51.9﹪,兩組差異亦無(wú)顯著性(x<'2>=0.236,P>0.05;OR=1.094,P>0.05).Ⅱ基因型攜帶者毛細(xì)支氣管炎患兒NPS中IL-4水平明顯高于Ⅳ和VV基因型者(Z=2.031、2.034,P均<0.05).但3種基因型間血清總IgE水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.021,P>0.05).IL-4Rα/50基因變異在輕度組和中重度組間差異亦無(wú)顯著性(x<'2>

10、=0.322,P>0.05). 4.IL.4Rα/Q576R位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組IL-4Ra/576位均發(fā)現(xiàn)QQ和QR 2種基因型,且以QQ純合子基因型所占比例較高.其中病人組QQ、QR基因型頻率分別為72.3﹪、27.7﹪,對(duì)照組分別為QQ 64.8﹪、QR 35.2﹪,兩組比較差異無(wú)顯著性(X<'2>=0.521,P>0.05):病人Q、R等位基因頻率分別為86.2﹪、13.8﹪,對(duì)照組Q

11、、R等位基因頻率分別為82.4﹪、17.6﹪,兩組比較差異亦無(wú)顯著性(X<'2>=1.261,P>0.05;OR=1.328,P>0.05).QR基因型攜帶患兒NPS中IL-4R水平明顯高于QQ基因型者(Z=2.205,P<0.05).病人組中2種基因型血清總IgE水平差異無(wú)顯著性(t=0.452,P>0.05).IL-4Ra/576基因變異在輕度組和中重度組間差異亦無(wú)顯著性(X<'2>=1.393,P>0.05). 5.IL-

12、10/T-819C位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組IL-10/T-819C位點(diǎn)基因測(cè)序結(jié)果顯示:病人組TT、CT、CC基因型頻率分別為45.6﹪、40.4﹪和14.0﹪,對(duì)照組基因型頻率分別為TT 47.8﹪、CT 36.7﹪、CC 15.5﹪,兩組比較差異無(wú)顯著性(X<'2>=0.306,P>0.05);病人組等位基因頻率T 65.8﹪、C 34.2﹪,對(duì)照組分別為T 66.1﹪、C 33.9﹪,兩組差異辦無(wú)統(tǒng)

13、計(jì)學(xué)意義(x<'2>=0.005,P>0.05;OR=0.986,P>0.05).患兒3種基因型間NPS中IL-10及血清總IgE水平的差異均無(wú)顯著性fH=0.676和F=0.687,P均>0.05).IL-10/-819基因變異在輕度組和中重度組間的差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X<'2>=0.779,P>0.05).6-IL-10/A-1082G位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組IL-10/A-1082G位點(diǎn)基因多態(tài)性測(cè)

14、序結(jié)果顯示:病人組AA、AG基因型頻率分別為86.8﹪、13.2﹪,對(duì)照組分別為AA 87.8﹪、AG 12.2﹪,兩組差異無(wú)顯著性(X<'2>=0.040,P>0.05);病人組等位基因頻率A 93.4﹪、G 6.6﹪,對(duì)照組為A 93.9﹪、G6.1﹪,兩組比較差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X<'2>=0.037,P>0.05;OR=0.924,P>0.05).病人組IL-10/-1082位2種基因型間NPS中IL-10及血清總IgE水平差異

15、均無(wú)顯著性(Z=0.620和t=1.107,P均>0.05).IL-10/-1082位點(diǎn)基因變異在輕度組和中重度組患兒中的差異亦無(wú)顯著性(X<'2>=1.3793,P>0.05).7.INF-7/A+874T位點(diǎn)基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系:病人組和對(duì)照組均發(fā)現(xiàn)INF-r/A+874T位點(diǎn)基因多態(tài)性,以AA純合子基因型為主, TT基因型僅在對(duì)照組中見(jiàn)到1例. 結(jié)論： 1.溫州地區(qū)兒童存在IL-4/C-589T、C-33T

16、位點(diǎn)的突變.IL-4/-589T等位基因與RSV毛細(xì)支氣管炎的易感性存在關(guān)聯(lián),其可能是影響RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)病的一個(gè)重要的候選基因.未發(fā)現(xiàn)IL-4/-33突變與RSV毛細(xì)支氣管炎存在關(guān)聯(lián). 2.溫州地區(qū)兒章存在IL-4Rα/150V、Q576R.位點(diǎn)的突變.IL-4Rα/I50V位點(diǎn)Ⅱ基因型及IL-4Ra/576R突變與RSV毛細(xì)支氣管炎NPS中IL-4R水平增高有關(guān),但未發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)位點(diǎn)變異與疾病易感性、疾病嚴(yán)重程度和血清總I