IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因甲基化與子宮頸癌的相關(guān)性.pdf

1、目的:炎性細(xì)胞因子的異常表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，主要發(fā)生在基因啟動子區(qū)的CpG序列中胞嘧啶堿基，能直接抑制基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而影響基因的表達(dá)。本研究采用甲基化特異性PCR法(MSP)研究子宮頸癌中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)，反轉(zhuǎn)錄-PCR法(RT-PCR)半定量檢測其表達(dá)，旨在探討IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17

2、、IL-1β基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)對其表達(dá)情況的影響，從而探討DNA甲基化異常在子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為子宮頸癌發(fā)生風(fēng)險的評估、診斷和治療提供新的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1采用MSP法檢測2012年3月-2013年3月從唐山工人醫(yī)院婦產(chǎn)科門診和住院部收集的43例正常宮頸組織、62例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織（其中CINⅠ23例，CINⅡ-Ⅲ39例）和43例宮頸癌組織中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、I

3、L-1β基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。
　　2采用RT-PCR法進(jìn)行半定量檢測不同宮頸組織中IFN-γ、 TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因的mRNA表達(dá)水平，分析不同基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)對其mRNA表達(dá)的影響以及與不同臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　3數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0軟件，雙變量相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)，各組間甲基化率的比較行卡方檢驗或Fisher確切概率法，Bonferroni校正法

4、調(diào)整檢驗水準(zhǔn)。PCR半定量檢測mRNA相對表達(dá)量原始數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗。雙側(cè)檢驗P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.IFN-γ基因甲基化率在對照組(4.65％)、CINⅠ組(3.04％)、CINⅡ-Ⅲ組(15.38％)和宮頸癌組(20.93％)依次呈上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。CINⅡ-Ⅲ組和宮頸癌組IFN-γ mRNA的表達(dá)均低于對照組（0.71±0.35、0.

5、60±0.29 vs0.93±0.43，P＜0.05），宮頸癌組低于CINⅠ組（0.60±0.29 vs0.81±0.36，P＜0.05）;IFN-γ mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.28±0.24 vs0.83±0.34，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)，但無統(tǒng)計學(xué)意義(rs=-0.155，P＞0.05)。
　　2.TNF-α基因在CINⅡ-Ⅲ組及宮頸癌組的甲基化率顯著低于對照組(15.4％、9.3％

6、 vs48.8％，P＜0.05)。mRNA相對表達(dá)量在對照組（0.46±0.18）、CINⅠ組（0.69±0.15）、CINⅡ-Ⅲ組（0.85±0.17）及宮頸癌組（0.96±0.17）依次呈上升趨勢(P＜0.05);mRNA在甲基化組的表達(dá)顯著低于非甲基化組（0.44±0.17 vs0.85±0.20，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.411，P＜0.05）。
　　3.IL-4基因甲基化率在不同組分別

7、為:對照組7.0％、CINⅠ組17.4％、CINⅡ-Ⅲ組17.9％和宮頸癌組23.3％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。mRNA相對表達(dá)量在對照組為0.28±0.24、CINⅠ組0.47±0.20、CINⅡ-Ⅲ組0.69±0.27及宮頸癌組0.85±0.18呈上升趨勢(P＜0.05)。IL-4 mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.40±0.25 vs0.62±0.32，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)(rs=-

8、0.258，P＜0.05)，但相關(guān)性弱。
　　4.IL-17基因甲基化率在CINⅡ-Ⅲ和宮頸癌組顯著低于對照組（53.8％、46.5％ vs83.7％，P＜0.05）。宮頸組織中IL-17 mRNA的相對表達(dá)水平在宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組和CINⅠ組顯著高于對照組（0.76±0.29、0.70±0.19、0.62±0.26 vs0.50±0.18，P＜0.05），但三組之間差別不大。IL-17mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組

9、(0.52±0.16 vs0.90±0.17，P＜0.05)，甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.627，P＜0.05）。
　　5.IL-1β基因在宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組的甲基化率低于對照(32.6％、48.7％ vs81.4％，P＜0.05)，宮頸癌組低于CINⅠ組(32.6％ vs69.6％，P＜0.05)。宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組IL-1β基因mRNA的相對表達(dá)顯著高于CINⅠ組、對照組（0.90±0.35、0.

10、80±0.35 vs0.60±0.29、0.49±0.26，P＜0.05），IL-1β mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.46±0.21 vs1.03±0.23，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.653，P＜0.05）。
　　6.在宮頸癌組，IL-17基因甲基化率在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的宮頸癌組織中分別為64％、27.3％、14.3％，具有顯著性差異(P＜0.05)，而IL-17基因甲基化率在不同

11、年齡段、不同病理分級，及IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-1β在不同年齡、病理分級和臨床分期無差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.TNF-α、IL-17、IL-1基因啟動子區(qū)甲基化水平的降低是導(dǎo)致TNF-α、IL-17、IL-1β基因mRNA表達(dá)升高的原因之一，參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。
　　2.IFN-γ mRNA的低表達(dá)和IL-4 mRNA高表達(dá)是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的原因之一。
　　3.宮頸癌患者中