RP-HPLC法對(duì)復(fù)方茯苓苷草湯中有效部位(群)的成分檢測(cè).pdf

1、[目的]
　　 在對(duì)復(fù)方茯苓甘草湯防治常壓缺氧性肺動(dòng)脈高壓有效部位(群)的研究取得階段性成果的基礎(chǔ)上，本課題擬將藥典[61]推薦并結(jié)合實(shí)驗(yàn)條件所選擇的化學(xué)成分作為復(fù)方茯苓甘草湯的質(zhì)量控制指標(biāo)，通過(guò)RP-HPLC技術(shù)，優(yōu)化有效部位(群)的色譜條件，對(duì)有效部位(群)檢測(cè)，建立有效部位(群)的色譜圖，同時(shí)結(jié)合藥效學(xué)研究，在一定程度上研究該方治療HPH的物質(zhì)基礎(chǔ)，為研制出安全有效、應(yīng)用方便又便于質(zhì)控的治療HPH的中藥制劑打下一定的基礎(chǔ)；

2、為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化發(fā)展在方法學(xué)上提供一定的參考。
　　 [方法]
　　 實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)階段：藥液組分分離階段、單味藥的活性成分檢測(cè)階段、有效部位(群)活性成分檢測(cè)階段：
　　 1.藥液組分分離階段：
　　 用HP20型大孔吸附樹脂將復(fù)方茯苓甘草湯全方水煎液分離，分別用蒸餾水、30％乙醇、60％乙醇和95％乙醇洗脫，得到相應(yīng)的四部分，揮盡回收溶劑后獲得提取物，轉(zhuǎn)溶，調(diào)整體積，罐封冷藏。
　　 2.單味藥

3、的活性成分檢測(cè)階段：
　　 2.1摸索并優(yōu)化復(fù)方中桃仁、桂枝、知母三味藥的主要活性成分的色譜條件
　　 2.2將確定的檢測(cè)條件應(yīng)用于全方水煎液進(jìn)行定性定量分析；
　　 3.有效部位(群)活性成分檢測(cè)階段：
　　 將上述檢測(cè)條件應(yīng)用于60％洗脫液、95％洗脫液中進(jìn)行檢測(cè)，并同時(shí)對(duì)30％洗脫液、蒸餾水洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，作定性定量分析，對(duì)比參考。
　　 [結(jié)果]
　　 1.確定三種活性成分的色譜條

4、件如下：
　　 1.1桃仁(苦杏仁苷)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.5％冰醋酸(25:75，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；流速：1ml/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。
　　 1.2桂枝(桂皮醛)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：水-甲醇(55:45，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)：

5、285nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃：進(jìn)樣量：20μL。
　　 1.3知母(芒果苷)的色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醛-1％冰醋酸(20:80，v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。
　　 2.建立了上述三種活性成分在復(fù)方茯苓甘草湯中的色譜圖；
　　 3.復(fù)方茯苓甘草湯中苦杏仁苷的含量為0

6、.1967mg.g-1
　　 4.復(fù)方茯苓甘草湯中桂皮醛苷的含量為20.21μg.g-1
　　 5.復(fù)方茯苓甘草湯中芒果苷的含量為0.236mg.g-1
　　 6.將上述的色譜條件應(yīng)用于四種濃度的溶液進(jìn)行檢測(cè)：
　　 6.1僅在30％液中檢測(cè)到苦杏仁苷，含量為0.18mg.g-1其余溶液中均未發(fā)現(xiàn)；
　　 6.2在四種溶液中均未發(fā)現(xiàn)桂皮醛；
　　 6.3在95％液，蒸餾水洗脫液中未發(fā)現(xiàn)芒果

7、苷，在60％液、30％液中發(fā)現(xiàn)芒果苷；但因?yàn)椴辉诰€性范圍內(nèi)，無(wú)法計(jì)算含量。
　　 [結(jié)語(yǔ)]
　　 (1)RP-HPLC法可以為復(fù)方茯苓甘草湯的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。
　　 (2)三個(gè)成分在復(fù)方茯苓甘草湯中的色譜圖可以作為復(fù)方茯苓甘草湯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)圖。
　　 (3)本實(shí)驗(yàn)探索了中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)，研究表明通過(guò)RP-HPLC法檢測(cè)中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)是有意義的。
　　 (4)上述三點(diǎn)也為復(fù)方茯苓甘草湯的