大黃素對(duì)CBRH-7919細(xì)胞凋亡及凋亡誘導(dǎo)因子、核酸內(nèi)切酶G mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：根據(jù)國內(nèi)外近年對(duì)凋亡途徑的研究成果，進(jìn)一步研究大黃素（EM）對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞CBRH-7919細(xì)胞凋亡及凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）和核酸內(nèi)切酶G（EndoG）mRNA表達(dá)的影響，探討大黃素的抗癌機(jī)制。 方法： （1）體外細(xì)胞培養(yǎng)：常規(guī)培養(yǎng)大鼠肝癌細(xì)胞CBRH-7919； （2）應(yīng)用MTT法檢測不同濃度大黃素對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞系CBRH-7919增殖抑制作用，并計(jì)算其不同時(shí)間點(diǎn)的IC50值，根據(jù)MTT干預(yù)結(jié)果選擇干預(yù)條

2、件； （3）實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組、Caspase抑制劑Z-VAD-FMK干預(yù)組、大黃素組、大黃素+Z-VAD-FMK組四組； （4）應(yīng)用原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測各組細(xì)胞凋亡情況。 （5）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QT-PCR）法檢測各組AIF、EndoG mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：MTT法檢測顯示大黃素能抑制大鼠CBRH-7919細(xì)胞的增殖，其48h時(shí)IC50值為44.8μmol/L，且呈劑量依賴效應(yīng)

3、關(guān)系和時(shí)間依賴效應(yīng)關(guān)系。用大黃素（48h IC50濃度）、大黃素聯(lián)合Caspase抑制劑處理CBRH-7919細(xì)胞后光鏡下可見明顯的凋亡細(xì)胞；TUNEL法檢測示凋亡細(xì)胞數(shù)隨處理時(shí)間延長而增多。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測示大黃素及大黃素+Z-VAD-FMK組細(xì)胞AIF、EndoG mRNA表達(dá)上調(diào)，與空白組比，差異有顯著性。 結(jié)論：大黃素對(duì)大鼠肝癌CBRH-7919細(xì)胞的增殖抑制作用呈劑量與時(shí)間依賴性；大黃素能上調(diào)AIF、EndoG