IL-33在皮膚傷口愈合過程中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、機(jī)體組織傷口的愈合過程十分復(fù)雜,由多種組織細(xì)胞、免疫細(xì)胞及相關(guān)分子共同參與,經(jīng)有序調(diào)控而完成組織修復(fù),整個(gè)過程可以分為炎癥期、增殖期和塑型期共三個(gè)階段。目前,組織傷口愈合的機(jī)制研究成為創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)課題,尤其是一些難愈性的組織傷口給病人造成極大的痛苦,并給臨床治療工作帶來(lái)很大的困惑。促組織傷口愈合的治療措施通常為局部給予敷料或抗生素來(lái)促進(jìn)傷口修復(fù)和避免傷口的感染,但對(duì)于一些感染后難愈性傷口,療效往往不令人滿意。IL-33是新近發(fā)

2、現(xiàn)的一種前炎性細(xì)胞因子,屬于IL-1超家族成員。IL-33通過與細(xì)胞表面受體ST2L結(jié)合,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答向Th2型偏移,促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的分泌,可調(diào)節(jié)組織細(xì)胞如上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及免疫細(xì)胞如肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的功能活性。本課題擬建立小鼠非感染性皮膚傷口和耐藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)感染傷口兩種動(dòng)物模型,探討IL-33在傷口修復(fù)過程中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　研究目的:通過觀察I

3、L-33在小鼠皮膚傷口組織中的變化情況,探討外源性IL-33在皮膚感染性及非感染性傷口修復(fù)中的作用及其機(jī)制,為提高組織傷口(尤其難愈性傷口)愈合的治療措施提供新的思路和方向。
　　研究方法:建立小鼠背部皮膚傷口模型,通過給予外源性IL-33的治療,觀察小鼠傷口的愈合時(shí)間和愈合率;皮膚組織mRNA提取后,RT-PCR鑒定相關(guān)細(xì)胞生長(zhǎng)因子的基因表達(dá)水平;皮膚組織固定,經(jīng)HE染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色,觀察傷口局部新生血管

4、與肉芽組織的形成、局部成纖維細(xì)胞與炎性細(xì)胞的數(shù)量、膠原纖維的增殖以及替代活化途徑巨噬細(xì)胞(AAM)的產(chǎn)生。體外檢測(cè)IL-33促進(jìn)成纖維細(xì)胞(NIH3T3)遷移的作用。
　　研究結(jié)果:
　　1.優(yōu)化表達(dá)IL-33蛋白
　　GST-IL-33融合蛋白經(jīng)誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化及表達(dá)部位的鑒定后,表達(dá)菌株培養(yǎng)2h37℃250rpm,加入終濃度1mMIPTG誘導(dǎo)4h,經(jīng)過超聲裂解、純化、酶切、去內(nèi)毒素等獲得IL-33。
　　2.I

5、L-33促進(jìn)小鼠非感染性皮膚傷口愈合的作用
　　建立BALB/c小鼠皮膚傷口模型,經(jīng)IL-33治療后,對(duì)照組皮膚傷口的愈合時(shí)間為10天,治療組為8天。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),IL-33治療后成纖維細(xì)胞與膠原纖維數(shù)量增多,肉芽組織形成較對(duì)照組增加,傷口局部AAM與相應(yīng)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子如TGF-β、VEGF基因表達(dá)量增加,并能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移。
　　3.IL-33促進(jìn)小鼠皮膚耐藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)感染傷口的愈合作用<

6、br>　　建立C57BL/6小鼠皮膚傷口感染耐藥性金黃色葡萄球菌模型,經(jīng)IL-33治療后,對(duì)照組皮膚傷口的愈合時(shí)間為12天,治療組為10天。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),治療組成纖維細(xì)胞與膠原纖維數(shù)量較對(duì)照組增多,流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)脾臟Th17細(xì)胞的比例上升,傷口局部組織中TGF-β、IL-6、VEGF表達(dá)增加。
　　結(jié)論:成功誘導(dǎo)并制備IL-33蛋白;IL-33通過調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)AAM巨噬細(xì)胞生成,促進(jìn)成纖維細(xì)胞(NIH3