苯乙醇苷單體抗輻射活性篩選及其機制研究.pdf

1、目的：1.比較6種苯乙醇苷單體對X射線輻射損傷人皮膚成纖維細胞（Human Skin Fibroblasts，HSF）的體外輻射防護活性，從中篩選出輻射防護作用最強的苯乙醇苷單體并進一步篩選其最佳體外輻射防護劑量；2.選取體外輻射防護作用最強的苯乙醇苷單體，研究其對輻射損傷HSF凋亡、周期及胞內ROS水平的影響；3.探討所篩選苯乙醇苷單體對X射線輻射損傷HSF中Bcl-2、Bax、procaspase-3、ERK、JNK及磷酸化的ERK

2、、JNK蛋白異常表達的抑制作用。
　　方法：1.分別采用2 Gy、4 Gy、8Gy、16Gy、32Gy X射線對HSF進行一次性照射，篩選并構建最佳輻射損傷HSF模型，以MTT法檢測并比較6種苯乙醇苷單體對輻射損傷HSF增殖的影響，篩選出體外輻射防護作用最強的苯乙醇苷單體并進一步篩選其最佳體外輻射防護劑量；2.選取體外抗輻射活性最強的苯乙醇苷單體的最佳體外輻射防護劑量對HSF進行預防性干預，采用16Gy X射線一次性照射HSF進行

3、損傷，利用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡，PI染色法檢測細胞周期，熒光探針DCFH-DA檢測ROS；3.相同方法干預，利用Western blot法，檢測所篩選苯乙醇苷單體對X射線輻射損傷HSF中Bcl-2、Bax、procaspase-3、ERK、JNK及磷酸化的ERK、JNK蛋白異常表達的影響。
　　結果：1.16Gy一次性X射線輻射對HSF體外增殖活性具有顯著的抑制作用（P<0.01）。6種苯乙醇苷單體

4、對16Gy X射線輻射損傷HSF均有不同程度體外防護作用（P<0.01），其中以毛蕊花糖苷輻射防護作用最優(yōu)，又以50μg/ml劑量組于輻射后24 h的輻射防護作用最顯著。2.與模型組比較，50μg/ml毛蕊花糖苷能夠顯著降低 X射線輻射誘導的細胞早期凋亡率，有效減少細胞 G0/G1期阻滯，同時降低輻射損傷導致的ROS水平升高，其抑制輻射損傷HSF早期凋亡和減低胞內ROS水平的作用較50μg/ml芍藥苷組更顯著。3.與模型組比較，50μg

5、/ml毛蕊花糖苷能夠有效抑制輻射損傷HSF中Bax蛋白水平升高和Bcl-2、proaspase-3蛋白水平降低，同時減少ERK和JNK的活化，從而達到減少細胞凋亡的目的。
　　結論：苯乙醇苷單體對X射線輻射損傷HSF具有明顯的體外輻射防護作用，其中以50μg/ml毛蕊花糖苷組于輻射后24 h的輻射防護活性最優(yōu)；50μg/ml毛蕊花糖苷能夠有效減少X射線輻射誘導的G0/G1期阻滯，減少早期細胞凋亡，降低胞內ROS水平，提高輻射抗性；