TRPM8對肺動脈平滑肌張力的調(diào)控及其在肺高壓發(fā)病過程中的作用.pdf

1、目的：肺高壓（Pulmonary Hypertension，PH）病程中典型的血管病變多是由于肺血管平滑肌細(xì)胞（Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells，PASMCs）內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡所致。本研究分別采用野百合堿（Monocrotaline，MCT）一次性腹腔注射和慢性低氧（Chronic Hypoxia）持續(xù)誘導(dǎo)構(gòu)建PH大鼠模型以模擬不同類型PH的發(fā)病特征，比較肺動脈（Pulmonary Arte

2、ries，PAs）上的TRPM8表達(dá)及功能在兩類PH發(fā)生過程中的異同，旨在為PH提供新的防治靶向。
　　方法：SD大鼠分別采用一次性腹腔注射（50mg/kg）MCT和慢性低氧兩種方式誘發(fā)PH，觀察項(xiàng)目：(1)PH模型鑒定：平均右心室內(nèi)壓（mRVP）、右心室重量指數(shù)（RVMI）；(2)TRPM8的表達(dá)：real time RT-PCR分別檢測正常對照組（CON）大鼠和PH模型大鼠PAs上TRPM(1~8)mRNA的表達(dá)水平，從中找出

3、經(jīng)MCT和慢性低氧預(yù)處理后表達(dá)量發(fā)生明顯改變的亞型，用western blot進(jìn)一步對該蛋白的表達(dá)進(jìn)行定量分析；(3)分別描繪TRPM8mRNA與血流動力學(xué)指標(biāo)（mRVP、RVM I）改變的時間依賴性曲線，分析不同類型PH發(fā)生過程中TRPM8mRNA與mRVP的關(guān)系；(4)觀察大鼠離體PAs在不同濃度TRPM8激動劑薄荷醇（Menthol）作用下的張力改變。
　　結(jié)果：(1)相比CON組，MCT組和CH組大鼠mRVP及對應(yīng)的RVM

4、I顯著升高（P<0.01），表明MCT和慢性低氧可以誘發(fā)大鼠PH和右心室肥厚；(2)大鼠PAs同時表達(dá)TRPM(1~8)，但MCT和慢性低氧預(yù)處理僅導(dǎo)致TRPM8 mRNA表達(dá)水平下調(diào)（P<0.01），下調(diào)后的TRPM8mRNA在MCT組上的表達(dá)量較CH組更低；western blot進(jìn)一步證實(shí)PAs上的TRPM8蛋白在MCT組和CH組呈低表達(dá)（P<0.05）；(3)TRPM8 mRNA在慢性低氧1d后幅度最大并直接下調(diào)至最低，其表達(dá)量

5、在MCT預(yù)處理7d后開始下調(diào)，14d降至最低并維持至21d；與TRPM8下調(diào)相反，mRVP在PH發(fā)生過程中呈上調(diào)趨勢，但mRVP的升高均發(fā)生在TRPM8 mRNA下調(diào)之后，提示MCT和慢性低氧預(yù)處理先下調(diào)TRPM8 mRNA的表達(dá)，繼而引起mRVP升高，并逐漸誘發(fā)右心室代償性肥厚；(4)1~300μM Menthol能夠使CON組大鼠去內(nèi)皮PAs的基礎(chǔ)張力呈濃度依賴性下調(diào)，也可以阻斷1μM苯腎上腺素（Phenylephedrine，PH

6、EN）介導(dǎo)的收縮效應(yīng)，后者的量效曲線左移，說明Menthol給藥前的PAs張力水平?jīng)Q定了血管平滑肌的舒張程度；(5)1~300μM Menthol可以分別引起CON、MCT和CH組大鼠PAs基礎(chǔ)張力的下調(diào)，也能阻斷PHEN對三者的預(yù)收縮作用，與CON組相比，MCT預(yù)處理對Menthol介導(dǎo)的舒張效應(yīng)影響不大，而慢性低氧能夠顯著增強(qiáng)Menthol介導(dǎo)的舒張效應(yīng)，舒張曲線分別在1~300μM和10~100μM Menthol作用下發(fā)生左移。

7、
　　結(jié)論：TRP M8通道的激活可以明顯緩解血管平滑肌的高張力狀態(tài)，在不同類型PH發(fā)病過程中，TRPM8的下調(diào)可能是機(jī)體為適應(yīng)PAs持續(xù)收縮而采取的抗損傷措施，PH發(fā)生過程中，適度 TRPM8表達(dá)量的下調(diào)可以減少Ca2+內(nèi)流、緩解血管平滑肌的收縮，另一方面胞膜上適量的TRPM8可能通過與BKCa的偶聯(lián)作用可以引起平滑肌的舒張，因此在PH發(fā)病過程中適度調(diào)整PAs上 TRPM8的表達(dá)可以幫助維持[Ca2+]i的平衡，緩解肺動脈壓力的