MMP-2對ET-1誘導(dǎo)的肉雞肺動脈平滑肌細胞增殖的調(diào)控及其在PHS肉雞肺血管重構(gòu)中的作用.pdf

1、肉雞肺動脈高壓綜合征(pulmonary hypertension syndrome，PHS)是危害肉雞養(yǎng)殖業(yè)的主要代謝性疾病之一。近年來的研究表明，肺血管重構(gòu)是PHS的重要病理學(xué)變化特征。肺血管重構(gòu)以肺小動脈管腔狹窄、中膜肥厚以及非肌型動脈肌性化為特征，這一結(jié)構(gòu)性改變是導(dǎo)致肺動脈高壓得以維持并呈進行性發(fā)展的關(guān)鍵因素。肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arteriole smooth muscle cells，PASMCs)過度增殖

2、是造成PHS肉雞肺血管病理性重構(gòu)的重要原因，但引起這一改變的病理生理機制尚不十分明確。本研究的目的在于揭示ET-1在PHS肉雞肺血管重構(gòu)機制中的作用及其調(diào)控機制。
　　 試驗一，ET-1對肉雞肺動脈平滑肌細胞增殖的促進作用及其受體途徑。培養(yǎng)PASMCs，采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法觀察ET-1對肉雞肺動脈平滑肌細胞體外增殖的刺激作用，并觀察內(nèi)皮素A受體(ETAR)拮抗劑BQ123和B受體(ETBR)拮抗劑BQ788對ET-

3、1作用下的肉雞PASMCs增殖的影響。結(jié)果，ET-1可顯著刺激肉雞PASMCs增殖(P<0.05)，這一效應(yīng)可被BQ123阻斷；BQ788對ET-1刺激的PASMCs增殖無顯著影響(P>0.05)。
　　 試驗二，MMP-2對ET-1誘導(dǎo)的肉雞PASMCs增殖的調(diào)控作用。分離培養(yǎng)肉雞肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)，將細胞分為ET-1組、ET-1+基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)組、ET-1+Doxycycline(Do

4、xy)組和正常生長對照組，MTT比色法觀察各組中細胞增殖情況。采用RT-PCR法檢測MMP-2 mRNA表達采用明膠酶譜法檢測培養(yǎng)上清中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)活性。結(jié)果顯示，ET-1可顯著刺激PASMCs增殖(P<0.05)，其促PASMCs增殖的作用可被MMP-2抑制劑TIMP-2和Doxy抑制(P<0.05)。在ET-1作用下，MMP-2 mRNA表達和酶活性均較對照組顯著升高(P<0.05)；TIMP-2和Doxy均可顯

5、著抑制MMP-2mRNA表達及MMP-2的活性(P<0.05)。
　　 試驗三，選取PHS患雞和健康肉雞各10只，采取肺組織制成石蠟切片，采用Verhoeff氏鐵蘇木素染色法進行彈性纖維染色，測定直徑<60μM的肺細小動脈的平均中膜厚度(mMTPA)和管壁/管總面積(WA/TA)，以其作為反映肺血管重構(gòu)的指標(biāo)。免疫組織化學(xué)方法檢測肺小動脈中MMP-2的表達。結(jié)果顯示，PHS肉雞肺小動脈mMTPA和WA/TA值較健康肉雞顯著升高(

6、P<0.05)，MMP-2表達亦顯著上調(diào)(P<0.01)，MMP-2表達與WA/TA和mMTPA呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.928(P<0.01)、0.816(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本研究結(jié)果表明，ET-1對體外培養(yǎng)的肉雞PASMCs具有強烈的增殖促進作用，提示其在PHS肉雞肺血管重構(gòu)形成機制中的作用可能與其直接刺激血管平滑肌細胞增殖有關(guān)。
　　 2.ET-1對PASMCs增殖促進作用受MM