CaN和NFATc在肺高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移中的作用.pdf

1、肺高壓（pulmonary Hypertension,PH）以肺血管重構(gòu)為主要病理變化，而肺血管重構(gòu)與胞漿內(nèi)游離鈣濃度（[Ca2+]i）升高密切相關(guān)。最近的研究表明，胞漿內(nèi)升高的Ca2+通過Ca2+-鈣調(diào)素復(fù)合物（calmodulin,CaM），使鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（Calcineurin,CaN）活化，調(diào)節(jié)不同亞型的激活T細(xì)胞核因子（Nuclear factor ofactivated T cells,NFATc），從而調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞

2、的增殖。本研究通過建立慢性低氧（Chronic Hypoxemia,CH）和野百合堿（monocrotaline,MCT）誘導(dǎo)的PH大鼠模型之后，取其肺動(dòng)脈，進(jìn)行肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（Pulmonaryartery smooth muscle cells,PASMCs）的培養(yǎng)，然后在兩種模型PASMCs基礎(chǔ)上，分別采用CaN和NFATc的特異性免疫抑制劑環(huán)孢素A（CyclosporinA,CosA）和他克莫司（Tacrolimus,FK50

3、6）進(jìn)行處理，觀察兩種模型PASMCs的增殖和遷移情況，為PH的靶向治療提供理論依據(jù)。
　　目的：體外觀察CosA和FK506對(duì)慢性低氧和野百合堿所致P H大鼠PASMCs增殖和遷移中的影響，為PH的靶向治療提供理論依據(jù)。
　　方法：分別采用CH和MCT誘導(dǎo)SD雄性大鼠形成PH模型，分離肺動(dòng)脈，CH組在模塊化培養(yǎng)室（3％O2）內(nèi)維持CH的條件培養(yǎng)PASMCs，MC T組在常氧條件下培養(yǎng)PAS MCs，測定如下指標(biāo)：①P H模

4、型鑒定：右心重量指數(shù)（Right ventricular mass index,RVMI），平均右心室收縮壓（Mean right ventricular systolic pressure,mRVSP），平均右心室內(nèi)壓（Mean right ventricularpressure,mRVP）。②采用CosA處理兩種PH模型大鼠的PASMCs，再分別用MTT法和CCK-8法觀察其對(duì)增殖的影響，用劃痕法觀察其對(duì)遷移的影響。③采用FK506

5、處理兩種PH模型大鼠PASMCs，再分別用MTT法和CCK-8法觀察其對(duì)增殖的影響，用劃痕法觀察其對(duì)遷移的影響。
　　結(jié)果：與正常對(duì)照組（CON）相比，①CH和MCT大鼠的RVMI、mRVP和mRVSP均明顯增高，肺小動(dòng)脈的平滑肌肌層明顯增厚，管腔減小。提示慢性低氧和腹腔注射MCT均可以促使大鼠產(chǎn)生PH以及右心室肥大。②在無藥物處理情況下，CH組和MCT組的PAMSCs增殖顯著增加，提示PH引起細(xì)胞增殖。同時(shí)，CH組在一定時(shí)間范圍

6、內(nèi)與細(xì)胞低氧的時(shí)間呈上升依賴性。（12h：p<0.01；24h：p<0.01；48h：p<0.01；72h：p<0.01）。與同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖均明顯升高（p<0.01）；③CosA處理兩組模型大鼠PASMCs，能夠抑制細(xì)胞增殖（CH組：MTT法：p<0.01；CCK8法：p<0.01；MCT組：MTT法：p<0.01；CCK8法：p<0.01）。④FK506處理兩組模型大鼠PASMCs，能夠抑制細(xì)胞增殖（CH組：MTT法：

7、p<0.01；CCK8法：p<0.01；MCT組：MTT法：p<0.01；CCK8法：p<0.01）。⑤在無藥物處理的情況下，兩組模型的PAMSCs遷移高于CON組（CH組：p<0.01；MCT組：p<0.01），提示PH可以促進(jìn)細(xì)胞遷移。⑥CosA處理兩組模型大鼠，能夠抑制其PASMCs的遷移（CH組：p<0.01；MCT組：p<0.01）。⑦FK506處理兩組模型大鼠，能夠抑制其PASMCs的遷移（CH組：p<0.01；MCT組：p