茉莉酸甲酯和水楊酸對菊芋懸浮細(xì)胞菊糖含量的影響.pdf

1、菊芋(Helianthus tuberosus L.)是一種向日葵屬多年生草本植物，它具有較強的抗逆性，能在干旱、鹽堿、嚴(yán)寒等惡劣環(huán)境下生長，在國內(nèi)外被廣泛種植。菊芋塊莖中富含菊糖，菊糖是一種多聚果糖，有多種生理功能，目前被廣泛應(yīng)用到藥業(yè)及食品工業(yè)中。
　　利用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)提高植物次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，是生產(chǎn)某些代謝產(chǎn)物的新方法。本試驗以菊芋塊莖為材料，誘導(dǎo)出塊莖的愈傷組織，進而建立了菊芋塊莖懸浮細(xì)胞系，并對懸浮細(xì)胞培養(yǎng)條件進行了優(yōu)

2、化。以茉莉酸甲酯和水楊酸為誘導(dǎo)子，研究其對菊芋懸浮細(xì)胞菊糖含量的影響，為利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)進行菊糖工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。
　　本試驗研究結(jié)果如下:
　　(1)本研究首先誘導(dǎo)出菊芋塊莖愈傷組織，用MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L培養(yǎng)基可誘導(dǎo)出淡黃色，疏松均一的愈傷組織。
　　(2)利用誘導(dǎo)出的愈傷組織，轉(zhuǎn)接到MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L液體培養(yǎng)基中，建立了菊芋懸浮細(xì)胞系，在pH為

3、5.8～6.0，蔗糖濃度為30g/L，脯氨酸0.5 mg/L、谷氨酰胺1 mg/L的生長條件下，細(xì)胞生長狀態(tài)最好。進一步建立了懸浮細(xì)胞系生長曲線、pH變化曲線，得知細(xì)胞在第6天進入對數(shù)生長期，在18天生長量最大。
　　(3)建立了高效液相色譜測定懸浮細(xì)胞菊糖含量的方法，采用蒸發(fā)光檢測器，以乙腈和水為流動相（乙腈∶水=78∶22），流速1mL/min，柱溫30℃，進樣時間為20min。
　　(4)通過添加不同濃度的茉莉酸甲酯，

4、確定了100μmmol/L的茉莉酸甲酯為最佳濃度，可誘導(dǎo)細(xì)胞干重達到最大，為7.908mg/mL，誘導(dǎo)菊糖含量達到最高，為21.3％，菊糖產(chǎn)量與對照相比提高了71.13％;同時通過不同時間添加茉莉酸甲酯，確定了在第6天，即細(xì)胞即將進入對數(shù)生長期時添加茉莉酸甲酯，細(xì)胞干重達到最大，為7.888mg/mL，菊糖含量最高，為21.5％，菊糖產(chǎn)量與對照相比提高了72.35％。
　　(5)通過添加不同濃度的水楊酸，確定了60μmmol/L的