UTMD轉(zhuǎn)染HIF-1αshRNA聯(lián)合TAE治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：缺氧誘導(dǎo)因子1α(Hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)基因的激活和過表達(dá)是經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈栓塞術(shù)(transcatheter arterial embolization,TAE)后肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要因素，提高TAE的治療效果則必須抑制HIF-1α的高表達(dá)。
　　目的：超聲轉(zhuǎn)染HIF-1αshRNA至肝癌細(xì)胞內(nèi)，抑制HIF-1α的表達(dá)，提高TAE的治療效果。
　　方法：1、體外缺

2、氧培養(yǎng)大鼠肝癌細(xì)胞walker256，將靶向針對(duì)HIF-1α的短發(fā)夾狀RNA(small hairpin RNA，shRNA)即HIF-1αshRNA表達(dá)質(zhì)粒與超聲微泡Sonovue混合后，利用超聲靶向微泡破壞(ultrasound targeted microbubbles destruction, UTMD)技術(shù)將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，觀察HIF-1α的沉默效果。2、評(píng)估UTMD體內(nèi)轉(zhuǎn)染時(shí)不同條件對(duì)大鼠的損傷效應(yīng)；評(píng)估安全的轉(zhuǎn)染條件下介

3、導(dǎo)eGFP肝內(nèi)轉(zhuǎn)染時(shí)的轉(zhuǎn)染效果，有助于選擇安全、有效的轉(zhuǎn)染條件。3、構(gòu)建wistar大鼠肝癌模型。經(jīng)大鼠尾靜脈注入shRNA表達(dá)質(zhì)粒與SonoVue的混合液，同時(shí)在大鼠肝癌部位用合適的超聲條件擊碎微泡，將shRNA質(zhì)粒釋放入細(xì)胞，觀察沉默HIF-1α基因表達(dá)的效果和腫瘤大小的變化；超聲輻照完畢后行TAE。研究中設(shè)置不同的實(shí)驗(yàn)組：對(duì)照(control)組、UTMD組、TAE組、UTMD+TAE組，對(duì)比分析各組對(duì)肝癌的治療效果。
　　

4、結(jié)果：1、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)HIF-1αshRNA能夠有效抑制缺氧條件下walker256肝癌細(xì)胞內(nèi)HIF-1α的表達(dá)；2、UTMD介導(dǎo)基因肝內(nèi)轉(zhuǎn)染時(shí)，SonoVue劑量為4ul/g條件下，輻照條件為1MHz，20％DC，輻照6min時(shí)，超聲強(qiáng)度≤1.5w/cm2對(duì)大鼠無明顯損傷，1.5w/cm2輻照6min可以獲得較好的轉(zhuǎn)染效果。3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：control組腫瘤持續(xù)增大，TAE組肝癌前期腫瘤生長(zhǎng)明顯受抑制，后期出現(xiàn)復(fù)發(fā)，UTMD組