內臟高敏感大鼠結腸特異背根神經節(jié)神經元的興奮性及TRPV1、P2X3受體表達研究.pdf

1、背景與目的:腸易激綜合征(abdominal withdrawal reflex,IBS)是一組以腹痛或腹部不適同時伴有排便習慣及大便性狀改變?yōu)榘Y狀的腸道功能性疾病。臨床上較為常見,人群流行病學調查顯示IBS的發(fā)病率約為5％~10%[1],歐美等發(fā)達國家發(fā)病率較高,國內以北京、廣州、上海、浙江等地高發(fā)。該病嚴重影響患者的生活質量,但其發(fā)病機制尚未完全清楚。目前認為IBS的發(fā)病可能與內臟感覺異常、腸道動力異常、感染、神經-內分泌、遺傳等多

2、種因素有關,其中內臟感覺異常被認為是IBS主要的病理生理學基礎。在內臟感知過程中,長期以來人們推測來自胃腸道的疼痛感覺是由脊髓傳入纖維所介導的[2],疼痛信號起源于初級傷害性受體外周末梢,一種位于脊髓背根神經節(jié)(dorsal root ganglion neurons,DRG)上的特殊神經元,傷害性感受器能通過特殊受體如瞬時感受器電位香草素受體1(transient receptor potential vanilloid type-1

3、,TRPV1)和/或P2X嘌呤能受體(P2X purinoreceptors,P2XRs)將傷害性刺激轉變?yōu)橐环N電信號,并將這種信號由外周向中樞神經傳遞,引起相應的反射,調節(jié)內臟活動。但目前,TRPV1和P2XRs對內臟感覺調節(jié)的確切作用機制仍不清楚。因此在本研究中,我們采用大鼠乙酸造模制備內臟高敏感模型,用1,1'-二(十八烷基)-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰基花青高氯酸鹽(DiI)逆行示蹤標記結腸特異背根神經節(jié)神經元,探討結腸特

4、異背根神經節(jié)神經元的興奮性及TRPV1、P2X3受體表達情況,為研究IBS相關性腹痛提供新的治療靶點。
　　方法:出生10天的大鼠,結腸內給予0.5%乙酸(acetic acid,AA)溶液制備內臟高敏感大鼠模型(AA組),對照組(NS組)給予同等量0.9%生理鹽水(normalsaline,NS)。對成年后的大鼠進行結直腸擴張(CRD),主要用腹部回撤反射(AWR)值來評估內臟敏感性。在結腸壁上注射DiI逆行標記的DRG神經元為

5、結腸特異DRG神經元,酶解分離神經節(jié)成單細胞后,熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)并計數。采用全細胞膜片鉗技術記錄神經元的閾電位和動作電位頻率來反映結腸特異DRG神經元的興奮性。用免疫熒光技術觀察結腸特異背根神經節(jié)神經元上TRPV1、P2X3受體表達情況,并分別計算AA組AWR評分值與結腸特異DRG神經元上TRPV1受體陽性率、動作電位頻率、閾電流值的相關性,與結腸特異DRG神經元上P2X3受體陽性率、動作電位頻率、閾電流值的相關性。
　　

6、結果:
　　1.AA組大鼠在結腸乙酸灌注后出現(xiàn)排便異常,在每日進行刺激時,大鼠表現(xiàn)比較煩躁、畏懼和嘶叫,隨著天數增加,出現(xiàn)易激惹和好斗傾向;
　　2.與NS組相比,AA組大鼠分別在同一結直腸擴張壓力(5.332、7.998、10.664kPa)下AWR值明顯增高(P<0.05);
　　3.AA組結腸特異DRG神經元細胞直徑多分布于為35~45μm,NS組為25~35μm;
　　4.AA組神經元閾電流低于NS組(P

7、<0.05),2倍閾電流刺激下,引發(fā)出的AA組動作電位頻率高于NS組(P<0.05)。
　　5.AA組結腸特異DRG神經元上TRPV1和P2X3受體免疫陽性率較正常組明顯增加(P<0.01).
　　6.AA組AWR評分值在不同壓力結直腸擴張下均與結腸特異DRG神經元上TRPV1受體陽性率(P<0.01)、動作電位頻率(P<0.01)呈正相關、與閾電流值(P<0.05)呈負相關;與結腸特異 DRG神經元上 P2X3受體陽性率(