胚胎大鼠背根神經(jīng)節(jié)體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文胚胎大鼠背根神經(jīng)節(jié)體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王麗琴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：王維平;李春巖2003.3.1中文摘要d e r i v e d n e u r o t r o p h i cf a c t o r , G D N F ) 的N B l 培養(yǎng)基，于C 0 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。( 2 ) _ 幣t J 用差速貼壁法建立D R G s 的分離純化體系：將胰蛋白酶消化后的單細(xì)胞懸液首先種植在未包被

2、基質(zhì)的3 5 m m 的培養(yǎng)皿中，于C 0 2 培養(yǎng)箱中孵育5 0 分鐘，收集未貼壁的細(xì)胞懸液以1 0 6 細(xì)胞密度種植在預(yù)先包被P L L 和L N 的培養(yǎng)板中，在N B l 培養(yǎng)基中培養(yǎng)。( 3 ) 于培養(yǎng)的不同時(shí)間在倒置相差顯微鏡下觀察神經(jīng)元的存活、胞體變化及軸突生長(zhǎng)情況。用尼氏染色觀察培養(yǎng)神經(jīng)元的尼氏體分布。并通過神經(jīng)元特異性的烯醇化酶( n e u r o n a ls p e c i f i ce n o l a s eN

3、S E ) 進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色以鑒定培養(yǎng)的神經(jīng)元，并計(jì)數(shù)混合培養(yǎng)和純化培養(yǎng)體系中N S E 樣陽性神經(jīng)元所占的比率以鑒定培養(yǎng)體系的純度。結(jié)果：背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元( d o r s a l r o o tg a n g l i o n n e u r o n 。D R C J n ) 在體外合適的培養(yǎng)條件下可以存活，培養(yǎng)1 2 ．1 8 小時(shí)神經(jīng)元已貼壁，并長(zhǎng)出突起，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，突起增多，伸長(zhǎng)，細(xì)胞之間形成濃密的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)。培養(yǎng)過

4、程中神經(jīng)元胞體大小變化不大，形狀從剛接種時(shí)的球形演變?yōu)闄E圓形、三角形和多角形等。培養(yǎng)中的神經(jīng)元有一個(gè)逐漸成熟的過程，表現(xiàn)為核質(zhì)比不斷增加，培養(yǎng)不同時(shí)期都伴隨著部分神經(jīng)元的死亡。混合培養(yǎng)體系是神經(jīng)元、雪旺細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的雜合而成，可存活3 - 4 周。純化培養(yǎng)體系存活的主要是神經(jīng)元，可維持2 周。對(duì)培養(yǎng)的神經(jīng)元進(jìn)行尼氏染色可見顆粒狀或塊狀尼氏體分布在神經(jīng)元胞漿中，表明培養(yǎng)的神經(jīng)元生活狀態(tài)良好。用N S E 抗體對(duì)混合和純化兩種培養(yǎng)體系進(jìn)