BDNF-ERK1-2-CREB信號(hào)通路在alarin抗小鼠慢性抑郁模型中的作用.pdf

1、目的：研究新的生物活性肽alarin對(duì)慢性不可預(yù)知溫和刺激(UCMS)小鼠的抗抑郁樣作用，并初步探討該作用與BDNF-ERK1/2-CREB信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法：6周齡雄性昆明小鼠(18±2g)40只，采用UCMS模型，刺激共進(jìn)行7周。隨機(jī)分為四組:①正常對(duì)照組（Control）②UCMS模型組(Model)③alarin低劑量組（Ala L0.5nmol）④alarin高劑量組(Ala H1nmol)。應(yīng)激前測(cè)量基礎(chǔ)糖水消

2、耗率，應(yīng)激開始后每周上午進(jìn)行體重測(cè)量，應(yīng)激7周后各組小鼠側(cè)腦室給予相應(yīng)的藥物，給藥體積3μl，每天一次，給藥兩天，第一天給藥后進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)，第二天給藥45min后進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。
　　行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，分別取每只小鼠的皮層、海馬、嗅球和下丘腦這四個(gè)不同的腦區(qū)，保存于-80℃冰箱備用。采用RT-PCR的方法檢測(cè)小鼠各腦區(qū)BDNF和CREB的mRNA表達(dá);采用Western-blot方法檢測(cè)小鼠各腦區(qū)中p-E

3、RK1/2的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.UCMS對(duì)小鼠體重的影響
　　小鼠在應(yīng)激前的平均體重為(18.5±1.7)g，應(yīng)激5周后，正常對(duì)照組小鼠的平均體重為(26.4±4.2)g，而模型組小鼠的平均體重為(22.2±2.2)g，兩組小鼠的體重差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;應(yīng)激7周后，正常對(duì)照組小鼠的平均體重為(27.6±4.3)g，而模型組小鼠的平均體重為(22.2±2.8)g，兩組間的體重差異更為明顯（P＜

4、0.01）。
　　2.Alarin對(duì)UCMS小鼠行為學(xué)的影響
　　(1)小鼠糖水偏好實(shí)驗(yàn)小鼠在應(yīng)激前的平均糖水消耗率為74.12±12.21％;應(yīng)激7周后，正常對(duì)照組小鼠的平均糖水消耗率為74.32±11.89％，而模型組小鼠的平均糖水消耗率降低為57.48±15.41％（P＜0.05）;而alarin低劑量組(0.5nmol)和alarin高劑量（1nmol）的糖水消耗率分別是65.52±10.38％、66.10±11.4

5、8％，與模型組相比，糖水消耗率有所增加，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)UCMS7周后，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠的垂直運(yùn)動(dòng)得分(14.4±6.6)、水平運(yùn)動(dòng)得分(14.7±5.9)和清潔動(dòng)作次數(shù)(2.4±1.8)較正常對(duì)照組的垂直運(yùn)動(dòng)得分(37.3±13.8)、水平運(yùn)動(dòng)得分(47.4±19.8)和清潔動(dòng)作次數(shù)(7.9±3.3)均明顯減少（P＜0.01）;而alarin低劑量組(0.5nmol)小鼠的垂直運(yùn)動(dòng)得分(18.

6、1±6.1)、水平運(yùn)動(dòng)得分(21.7±6.7)、清潔動(dòng)作次數(shù)(3.8±1.9)和alarin高劑量組(1nmol)小鼠的垂直運(yùn)動(dòng)得分(25.0±7.6)、水平運(yùn)動(dòng)得分(29.0±8.9)、清潔動(dòng)作次數(shù)(5.1±3.6)，與模型組相比，這三個(gè)指標(biāo)均有所增加，其中alarin高劑量組作用比較明顯(P＜0.05)。
　　(3)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)UCMS7周后，正常對(duì)照組小鼠的強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間為(49.9±15.2)s，而模型組小鼠強(qiáng)迫游泳

7、的不動(dòng)時(shí)間為(168.4±26.6)s，兩組間差異明顯（P＜0.01）;而alarin低劑量組（0.5nmol）和alarin高劑量組（1nmol）小鼠的不動(dòng)時(shí)間分別是(101.8±22.5)s、(80.7±19.9)s，與模型組相比，強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間均明顯縮短（P＜0.01）。
　　3.Alarin對(duì)UCMS小鼠腦中BDNF和CREB mRNA表達(dá)的影響
　　RT-PCR結(jié)果顯示:①與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠的皮層和海

8、馬中BDNFmRNA的表達(dá)降低（P＜0.01），而在嗅球和下丘腦中BDNF mRNA的表達(dá)稍有降低，但差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。alarin低劑量組（0.5nmol）和alarin高劑量組(1nmol)中小鼠皮層和海馬BDNF mRNA的表達(dá)與模型組比較增加（P＜0.05）。②與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠的皮層、海馬、嗅球和下丘腦中CREB mRNA的表達(dá)降低(P＜0.01)，而alarin低劑量組(0.5nmol)和alarin高劑量組（1

9、nmol）中小鼠皮層、嗅球和下丘腦CREB mRNA的表達(dá)均增加（P＜0.05）。
　　4.Alarin對(duì)UCMS小鼠腦中p-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響
　　Western-blot結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠的皮層、海馬和嗅球中的p-ERK1/2的表達(dá)降低(P＜0.01)，下丘腦中p-ERK1/2的表達(dá)無(wú)變化;而alarin低劑量組(0.5nmol)和alarin高劑量組(1nmol)中小鼠皮層、海馬和嗅球中的p