ERK1-2-GSK3β-NFκB信號通路在IR促進慢性移植腎失功早期發(fā)病機制中作用的研究.pdf

1、目的:探討ERK1/2-GSK3β-NFκB信號通路介導胰島素抵抗(insuline resistance，IR)促進慢性移植腎失功（chronic renal allograft dysfunction，CRAD）早期發(fā)病機制中的作用。
　　方法:應用國際上公認的CRAD造模方式，移植成功后的大鼠隨機分為2組:普通飲食組（CRAD組）和高脂飲食組（CRAD+IR組），同時單腎切除組以普通飲食喂養(yǎng)，各組大鼠喂養(yǎng)8周后，測體重，內(nèi)眥

2、靜脈采血檢測甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、空腹血糖(fasting blood-glucose，F(xiàn)BG)、空腹血清胰島素(fasting serum lisulin，F(xiàn)INS)，計算HOMA-IR指數(shù);行葡萄糖耐量實驗(oral glucose tolerance test，OGTT)及胰島素耐量實驗(insulin tolerance test，ITT)，計算曲線下面

3、積，綜合評估大鼠IR程度。移植大鼠IR成模后，隨機分為3組:IR腎移植大鼠（安慰劑組）組，羅格列酮組（5mg/kg/d，灌胃），TDZD8（特異性GSK3β阻斷劑）組（1mg/kg/wk，尾靜脈注射），繼續(xù)喂養(yǎng)干預4周，收集血標本和24h尿標本后，于12周時在3％戊巴比妥鈉麻醉下，收獲動物腎臟組織，行組織病理學染色觀察模型腎組織病理變化，免疫組化染色和Western blot印跡技術(shù)檢測ERK1/2-GSK3β-NFκB信號蛋白及其下游

4、MCP-1和ICAM-1炎癥因子的表達情況。
　　結(jié)果:
　　一、高脂飲食喂養(yǎng)8周胰島素抵抗成模:與CRAD模型對照組及單腎切除對照組相比，CRAD+IR組的體重增量顯著升高(P＜0.05);FINS、FBG及HOMA-IR水平均顯著升高(P＜0.05);OGTT和ITT實驗結(jié)果顯示:與CRAD及單腎切除組相比，CRAD+IR組在0min，30min，60min，90min，120min時間點血糖水平顯著升高，OGTT-AU

5、C和ITT-AUC均明顯增高(P＜0.05)，提示CRAD+IR組大鼠餐后血糖高峰延遲;TG水平顯著增加(P＜0.05)，TC水平有增加趨勢，但是組間幾乎無統(tǒng)計學差異。綜上提示高脂飲食喂養(yǎng)腎移植大鼠胰島素抵抗模型成功。
　　二、藥物繼續(xù)干預4周后各項指標的變化
　?。ㄒ唬└鹘M大鼠血生化及尿液檢查結(jié)果
　　在12周末，與單腎切除對照組相比，CRAD模型組FINS、FBG、HOMA-IR水平及OGTT-AUC、ITT-AU

6、C無明顯差異;血肌酐和24h尿蛋白定量水平均顯著增加(P＜0.05);與CRAD模型對照組相比，CRAD+IR組大鼠上述指標水平均顯著增加(P＜0.05)。羅格列酮干預后，與CRAD+IR組相比，HOMA-IR指數(shù)明顯改善(P＜0.05)，大鼠血肌酐和24h尿蛋白定量水平顯著降低(P＜0.05);TDZD8干預后，上述指標改善無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　?。ǘ└鹘M大鼠腎臟組織病理變化
　　在12周末，單腎切除對照組腎

7、組織病理結(jié)構(gòu)未見明顯改變，單純CRAD組大鼠腎組織主要表現(xiàn)為腎小球系膜細胞增生，間質(zhì)炎癥細胞浸潤，腎小管可見大小不等空泡變性，部分腎小管擴張，腎動脈血管平滑肌細胞增生，輕度腎間質(zhì)纖維化。與單純CRAD組相比，CRAD+IR組上述病理改變加重。羅格列酮組及TDZD8組上述病理變化得到改善。
　?。ㄈ〦RK1/2-GSK3β-NFκB信號通路相關蛋白的表達情況
　　與單腎切除對照組大鼠相比，單純CRAD組大鼠P-ERK、P-G

8、SK3β及p-p65等蛋白表達增加(P＜0.05)，下游炎癥因子MCP-1和ICAM-1蛋白表達也相應增加(P＜0.05);與單純CRAD組相比，CRAD+IR組大鼠上述磷酸化蛋白均表達增加(P＜0.05)，MCP-1和ICAM-1炎癥指標表達也增加(P＜0.05);羅格列酮干預后，P-ERK、P-GSK3β及p-p65蛋白表達降低，下游的炎癥因子表達也相應降低(P＜0.05);TDZD8干預后，P-GSK3β及p-p65表達降低，下游