MAPK-ERK1-2信號通路在肝纖維化進(jìn)展中的機(jī)制研究.pdf

1、肝纖維化是慢性肝臟疾病進(jìn)展的標(biāo)志，因而控制肝纖維化進(jìn)展成為降低終末期肝病的發(fā)生率的有效途徑。近年來，信號通路在慢性肝病中的作用成為研究熱點(diǎn)，尋找有意義的信號通路可以預(yù)防和降低終末期肝病發(fā)生率，從而靶向治療終末期肝病。本課題分為兩個部分，首先從臨床方面發(fā)現(xiàn)MAPK/ERK1/2信號通路在慢性乙型病毒性肝炎病程進(jìn)展中的作用;進(jìn)一步在DMN肝纖維化小鼠模型中，深入研究SDF-1/CXCR4軸及其介導(dǎo)的MAPK/ERK1/2信號通路的重要作用。

2、
　　第一部分臨床研究
　　MAPK/ERK1/2信號通路在乙肝肝纖維化進(jìn)程中的作用.
　　目的:探討MAPK/ERK1/2信號通路在慢性乙型病毒性肝炎(Chronic Hepatitis B，CHB)肝纖維化進(jìn)展中的作用。觀察CHB患者ERK1/2及其下游因子NF-kB p65在慢性乙肝進(jìn)展不同肝硬度值（Liver stiffness values，LSM值）及HBV DNA、HBeAg水平之間的表達(dá)水平變化。對判斷

3、慢性肝炎程度，進(jìn)行干預(yù)治療，控制其向終末期肝病進(jìn)展有重要意義。
　　方法:選取2015年6月至2015年12月就診于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科門診及住院的99例CHB患者，收集患者病史資料、患者血清，檢測患者血清肝功能、HBV DNA、HBeAg、ERK1/2、NF-kB p65，測定患者LSM值。根據(jù)HBV DNA值將所有CHB患者分為兩組:HBV DNA＜500IU/ML組和HBV DNA≥500IU/ML組;根據(jù)HBeA

4、g的表達(dá)情況將所有CHB患者分為兩組:HBeAg(+)組和HBeAg(-)組;根據(jù)LSM值不同將患者分為四期:F0-F1期(＜7.4KPA); F2期(7.4-9.4KPA);F3期(9.4-17.5KPA); F4期(＞17.5KPA)，比較各組之間血清肝功能、ERK1/2和NF-kB p65表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果:1.隨著肝纖維化程度加重，血清肝功能中ALT、AST、Glob、ALP、GGT、TBil、DBil表達(dá)逐漸上升，

5、Alb、CHE表達(dá)逐漸下降，表現(xiàn)為肝功能的持續(xù)性損傷狀態(tài)。
　　2.HBV DNA≥500IU/ML時，ERK1/2及NF-kB p65表達(dá)水平均增加，且ERK1/2表達(dá)水平增加有顯著性差異(P＜0.05)。
　　3.HBeAg(+)時，ERK1/2及NF-kB p65表達(dá)水平均增加，且ERK1/2表達(dá)水平增加有顯著性差異(P＜0.05)。
　　4.LSM分期與ERK1/2及NF-kB p65表達(dá)水平呈正比。與F0-F

6、1期相比，ERK1/2及NF-kB p65表達(dá)水平均有顯著性增高(P＜0.05); F3期與F2期相比，ERK1/2及NF-kB p65表達(dá)水平均有顯著性增高(P＜0.05); F4期與F3期相比，ERK1/2表達(dá)水平均有顯著性增高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.隨著CHB患者肝纖維化程度加重，其肝功能也呈持續(xù)性損傷狀態(tài);
　　2.ERK1/2和NF-kB p65的表達(dá)水平與HBVDNA數(shù)量有關(guān)，HBV DNA≥500IU

7、/ML時，ERK1/2及NF-kB p65的表達(dá)水平均較高;
　　3.ERK1/2和NF-kB p65的表達(dá)水平與HBeAg表達(dá)有關(guān)，HBeAg(+)的CHB患者ERK1/2及NF-kB p65的表達(dá)水平均較高;
　　4.ERK1/2和NF-kB p65的表達(dá)水平隨LSM分期增加而增加，二者表達(dá)水平與肝纖維化程度成正比，可用于指導(dǎo)肝纖維化分期。
　　第二部分基礎(chǔ)研究
　　MAPK/ERK1/2信號通路在二甲基亞硝

8、胺肝纖維化小鼠中的作用
　　目的:探討MAPK/ERK1/2信號通路在二甲基亞硝胺（Dimethylnitrosamine，DMN）所致肝纖維化小鼠中的作用機(jī)制
　　方法:建立二甲基亞硝胺肝纖維化小鼠模型，分別描述各組小鼠一般狀況、肝功能、病理學(xué)改變、免疫熒光共定位水平變化以及用免疫組化染色、蛋白印跡(WesternBlot)、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Reverse Transcription-PCR，

9、RT-PCR)方法檢測α-SMA、ERK1/2及NF-kB p65的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.二甲基亞硝胺注射后，各組小鼠一般狀況、病理學(xué)情況明顯變差，肝功能ALT、AST、TBil、DBil、ALP于模型組1-4W均有顯著性增高(P＜0.05)，GGT在模型組1-3W有顯著性增高(P＜0.05)，Alb在模型組1-4W有顯著性降低(P＜0.05);CHE在模型組2-4W有顯著性降低(P＜0.05)。模型組各組之間的比較肝功能呈現(xiàn)

10、持續(xù)性損害。
　　2.免疫熒光共定位檢測在模型組1、2W僅見少量的CD90與Alb或CK18共定位陽性細(xì)胞表達(dá)，模型組3、4W可見CD90與Alb或CK18共定位陽性細(xì)胞逐漸增多。
　　3.免疫組化、Western Blot及RT-PCR檢測α-SMA、ERK1/2及NF-kB p65的表達(dá)水平均明顯上調(diào)。
　　結(jié)論:1.二甲基亞硝胺(DMN)導(dǎo)致小鼠肝纖維化過程中可以誘導(dǎo)部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向肝細(xì)胞樣細(xì)