咽舒噴霧劑的藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：研究咽舒噴霧劑的藥效學(xué)作用。
　　研究背景急慢性咽炎是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，目前還沒(méi)有令人滿意的治療藥物。咽舒噴霧劑是由11味中藥組成的復(fù)方制劑，前期作為醫(yī)院制劑治療急慢性咽炎療效顯著。在國(guó)家十一五“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)的資助下，對(duì)咽舒噴霧劑進(jìn)行了產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)研究中，本課題主要為咽舒噴霧劑的臨床前藥效學(xué)研究。
　　采用二甲苯致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足腫脹模型研究咽舒噴霧劑對(duì)急性炎癥的作用，并通過(guò)檢測(cè)炎癥因子COX

2、-2和PGE2確定其抗炎通路；運(yùn)用慢性肉芽腫和家兔慢性咽炎實(shí)驗(yàn)研究咽舒噴霧劑對(duì)慢性咽炎的影響；采用體外牛津杯法研究咽舒噴霧劑的體外抗菌活性；通過(guò)觀察免疫系統(tǒng)中免疫器官、免疫細(xì)胞及功能研究咽舒噴霧劑對(duì)免疫功能的影響。1.咽舒噴霧劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響：雄性昆明種小鼠，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、扶他林乳膠劑組、咽舒噴霧劑低劑量（涂藥1次）組和咽舒噴霧劑高劑量（涂藥2次）組，每組小鼠左、右耳前、后兩面分別用棉棒涂生理鹽水及相應(yīng)藥物。末次給

3、藥30 min后，在各組小鼠右耳涂二甲苯10μl（前后各5μl），1 h后處死動(dòng)物，用9 mm打孔器于每只小鼠的左右耳相同部位打下耳片，分別稱重，計(jì)算腫脹值、腫脹率和腫脹抑制率。2.咽舒噴霧劑對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響：雄性SD大鼠隨機(jī)分為模型組、扶他林乳膠劑組和咽舒噴霧劑組，各組大鼠左足分別用棉棒涂生理鹽水及相應(yīng)藥物（分5次給藥，間隔15 min）。末次給藥30 min后于大鼠左踝部作環(huán)形標(biāo)記，用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量大鼠左踝部作環(huán)形標(biāo)

4、記以下正常體積，然后在各組大鼠左足趾皮下注射1％角叉菜膠0.1 ml致炎。于致炎后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、和5 h分別測(cè)量大鼠左踝部環(huán)形標(biāo)記一下體積，計(jì)算腫脹率。同時(shí)，于致炎后3h麻醉處死大鼠，剝離致炎足趾部位的組織，制備成10%勻漿，檢測(cè)COX-2和PGE2。3.咽舒噴霧劑對(duì)大鼠慢性肉芽腫形成的影響：雄性Wistar大鼠10%水合氯醛麻醉，于肩胛骨之間正中切開(kāi)約1 cm小口，在兩側(cè)皮下各植入

5、一個(gè)20 mg的滅菌棉球，縫合。術(shù)后第2 d將造模大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、扶他林乳膠劑組、咽舒噴霧劑小、中、大劑量組，在植入棉球處皮膚分別噴涂生理鹽水、扶他林乳膠劑（每次100 mg）以及不同濃度受試藥物（每次400μl），4次/d，連續(xù)7 d。末次給藥24 h打開(kāi)原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，稱取干重，計(jì)算肉芽腫抑制率。4.咽舒噴霧劑對(duì)家兔慢性咽炎的影響：實(shí)驗(yàn)兔雌雄各半，隨機(jī)分為正常組、模型組、西瓜霜噴劑組、咽舒噴霧劑低、中

6、、高劑量組，除正常對(duì)照組外，其余家兔按照彭氏造模法造模。造模后，各組咽部噴霧給藥，4次/d，3撳/次，連續(xù)給藥2周，末次給藥24 h，取咽部組織HE染色，光鏡下觀察。5.咽舒噴霧劑體外抗菌實(shí)驗(yàn)：在無(wú)菌操作條件下，分別取金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌菌懸液200μl（濃度：1×107/ml），均勻涂抹在培養(yǎng)基上。自然干燥15 min，用無(wú)菌鑷將牛津杯輕放在培養(yǎng)基表面，輕壓使其接觸良好。吸取不同濃度的咽舒噴霧劑藥液（原液及倍比稀釋的藥液共

7、7個(gè)濃度）個(gè)0.2 ml于牛津杯中，另外設(shè)置陰性對(duì)照組（生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組（青霉素），各樣品重復(fù)3次，4℃放置4-5 h，30℃培養(yǎng)24 h，測(cè)量供試液有效抑菌圈的直徑。6.咽舒噴霧劑對(duì)正常小鼠免疫器官和血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響：雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、醋酸地塞米松（5 mg/kg）組、咽舒噴霧劑小（10 g/kg）、中（20 g/kg）和大（40 g/kg）劑量組。每天灌胃給予相應(yīng)藥物1次，共7 d。末次給藥24 h，檢測(cè)血常

8、規(guī)，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。7.咽舒噴霧劑對(duì)正常小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響：雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、醋酸地塞米松（5 mg/kg）組、咽舒噴霧劑?。?0 g/kg）、中（20 g/kg）和大（40 g/kg）劑量組。每天灌胃給藥1次，共7 d。末次給藥2 h，尾靜脈注射印度墨汁（0.1 ml/10 g），注射后3 min和13 min內(nèi)眥取血20μl，加入含0.1%Na2CO31 ml的EP管中，搖勻比色，取肝臟和脾臟計(jì)算吞

9、噬指數(shù)。
　　1.咽舒噴霧劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響：與對(duì)照組比較，扶他林組小鼠耳腫脹值和腫脹率均顯著降低（p<0.05），腫脹抑制率為37.3%；咽舒噴霧劑高劑量組小鼠耳腫脹值和腫脹率均顯著降低（p<0.05），腫脹抑制率為34.7%，低劑量組小鼠耳腫脹值和腫脹率與對(duì)照組比較未見(jiàn)顯著差異。2.咽舒噴霧劑對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響：模型組大鼠注射角叉菜膠后，足趾腫脹隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加，2.5-3 h達(dá)到高峰；扶他林組足趾腫脹較

10、緩慢，給藥后2 h、2.5 h腫脹率與模型組比較顯著降低（p<0.05）；咽舒噴霧劑組在給藥后2 h、2.5 h與模型組比較也顯著降低（p<0.05或p<0.01）。與模型對(duì)照組比較，扶他林乳膠劑與咽舒噴霧劑均能顯著降低大鼠腫脹組織COX-2（p<0.01；p<0.05）與PGE2（p<0.01；p<0.05）含量。3.咽舒噴霧劑對(duì)大鼠慢性肉芽腫形成的影響：扶他林乳膠劑組與咽舒噴霧劑大劑量組大鼠肉芽組織增生均顯著低于模型對(duì)照組（p<0.

11、01；p<0.05），小、中劑量組大鼠肉芽組織增生與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。4.咽舒噴霧劑對(duì)家兔慢性咽炎的影響：病理檢測(cè)，正常組細(xì)胞核正常，上皮未見(jiàn)增生，細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)正常；模型組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯，結(jié)締組織增生，細(xì)胞間連接不緊密，血管擴(kuò)張?jiān)錾麧{內(nèi)有黏液；西瓜霜噴劑組及咽舒噴霧劑大劑量組有輕微線粒體腫脹及少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；咽舒噴霧劑小、中劑量組：炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，血管擴(kuò)張?jiān)錾黠@。5.咽舒噴霧劑體外抗菌實(shí)驗(yàn)：與生理

12、鹽水比較，青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌有明顯的抑菌圈（44.3±1.6 mm；19.3±0.6 mm），咽舒噴霧劑原液及2、4、8、16倍稀釋液對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯抑菌圈，咽舒噴霧劑原液和2、4倍稀釋液對(duì)乙型溶血性鏈球菌有明顯抑菌圈。6.咽舒噴霧劑對(duì)正常小鼠免疫器官和血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響：與正常對(duì)照組比較，醋酸地塞米松能顯著降低正常小鼠的胸腺與脾臟指數(shù)（p<0.01）和血淋巴細(xì)胞數(shù)（p<0.01），咽舒噴霧劑不同劑量對(duì)正常小

13、鼠的胸腺與脾臟指數(shù)和血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)顯著影響。7.咽舒噴霧劑對(duì)正常小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響：與正常對(duì)照組比較，醋酸地塞米松能顯著降低正常小鼠的吞噬功能（p<0.01），咽舒噴霧劑不同劑量對(duì)正常小鼠吞噬功能無(wú)顯著影響。
　　咽舒噴霧劑對(duì)急性炎癥有顯著的抑制作用，對(duì)慢性炎癥有明顯的緩解作用，且其抗炎作用與抑制炎癥因子COX-2和PGE2有關(guān)。在體外抗菌實(shí)驗(yàn)中，咽舒噴霧劑對(duì)革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌均有明顯的抑制作用。咽舒噴霧劑對(duì)免疫器官