瑤藥風濕骨痛噴霧劑抗類風濕性關節(jié)炎藥效學毒理學研究.pdf

1、目的：研究瑤藥風濕骨痛噴霧劑（ROS）對佐劑性關節(jié)炎（AA）大鼠、膠原誘導性關節(jié)炎（CIA）大鼠的抗風濕效應及其作用機制；并通過急性毒性實驗、皮膚過敏實驗、長期毒性實驗來評價其藥物安全性，為臨床應用提供依據(jù)。
　　方法：1、采用生斷腸草，兩面針,七葉一枝花，九節(jié)風等藥材，用80％乙醇超聲提取，濃縮至6.3g/mL待用。
　　2、采用大鼠背部去毛給藥方法,進行完整和破損皮膚急性毒性實驗。觀察動物的體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的

2、變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動的變化。對死亡動物大體解剖，其他動物在觀察期結(jié)束后大體進行解剖。用肉眼觀察主要臟器的顏色、體積、相對位置；當有肉眼可見病變時，則對病變器官進行組織病理學檢查。
　　3、采用豚鼠兩側(cè)背部去毛給藥的方法，進行皮膚過敏性試驗，觀察局部用藥的過敏反應，計算反應的平均值和致敏發(fā)生率。
　　4、采用大鼠背脊兩側(cè)脫毛，手術刀片劃傷至滲血，建立破損皮膚模型；實驗期間觀察大鼠外觀體征、行為活動、皮毛、糞

3、便、食量和體重的變化;測定血清中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）；谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）；堿性磷酸酶（AKP）；尿素酶（BUN）；總蛋白(TP)；白蛋白(ALB)；總膽紅素（T-BIL）；肌酸激酶（CK）；鈉（Na）；氯（CL）；總膽固醇（TCHO）的含量,并觀察各組大鼠肝臟、腎臟、脾臟HE染色病理形態(tài)學變化。
　　5、采用完全弗式佐劑建立類風濕性關節(jié)炎模型（AA）。每3天測量一次致炎足(原發(fā)性)和對側(cè)足(繼發(fā)性)的體積，計算足趾腫脹度和腫脹

4、抑制率。檢測血清及炎性組織液中白介素-1（IL-1），白介素-6（IL-6），腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，前列腺素E2(PGE2)，類風濕因子（RF）的含量，并觀察各組大鼠踝關節(jié)HE染色病理形態(tài)學變化。
　　6、采用牛二型膠原建立類風濕性關節(jié)炎模型（CIA）。每3天測量一次致炎足(原發(fā)性)和對側(cè)足(繼發(fā)性)的體積，計算足趾腫脹度。檢測血清及炎性組織液中白介素-1（IL-1），白介素-6（IL-6），腫瘤壞死因子-α(TNF-α

5、)，前列腺素E2（PGE2），類風濕因子（RF）的含量，并觀察各組大鼠踝關節(jié)HE染色病理形態(tài)學變化。
　　結(jié)果：1、急性毒性實驗：ROS-H，ROS-L無一例死亡，外觀、行為活動、精神狀態(tài)、大小便、呼吸狀況正常，臟器的體積、顏色、相對位置無異常變化，各組體重無顯著性差異（p>0.05）。
　　2、皮膚過敏性實驗:ROS組與空白對照組相比，動物的一般狀態(tài)、行為活動、外觀體征均無異常，既無紅斑也無水腫，差異無顯著性意義。ROS對

6、豚鼠無致敏作用。
　　3、長期毒性實驗：連續(xù)給藥3個月，停藥2 w，無大鼠死亡，ROS-H、ROS-M、ROS-L給藥組體重、血液學、血液生化學、臟器系數(shù)與空白對照組比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。系統(tǒng)尸解，主要臟器的顏色位置未見異常，肝臟、脾臟、腎臟HE染色沒有明顯病理學改變。
　　4、佐劑性關節(jié)炎模型大鼠（AA）藥效學實驗：①ROS給藥組可明顯減輕AA大鼠的足趾腫脹度；②ROS給藥組可以降低關節(jié)炎指數(shù)（AI）（p<

7、0.05）；③ROS各給藥組均能降低血清和炎性組織液中PGE2，IL-1，IL-6，TNF-a，RF水平(P＜0.05 or P＜0.01)；④病理組織學檢查，ROS給藥組能夠抑制類風濕性關節(jié)炎大鼠的滑膜增厚和炎性細胞浸潤。ROS對佐劑性關節(jié)炎大鼠具有較好的治療效果。
　　5、膠原誘導性關節(jié)炎大鼠模型藥效學實驗:①ROS給藥組可明顯減輕AA大鼠的足趾腫脹度；②ROS給藥組可以降低關節(jié)炎指數(shù)（AI）（p<0.05）；③ROS各給藥組

8、均能降低降低血清和炎性組織液PGE2，IL-1，IL-6,TNF-a，RF水平(P＜0.05 or P＜0.01)；④病理組織學檢查，ROS給藥組能夠抑制大鼠關節(jié)的滑膜增厚和炎性細胞浸潤。所以，ROS對膠原誘導性關節(jié)關節(jié)炎具有較好的治療效果。
　　結(jié)論：1、皮膚過敏性實驗表明，ROS對皮膚不具有致敏反應；2、急性毒性、長期毒性實驗表明，ROS經(jīng)皮膚短期、長期給藥都是安全無毒害的。3、佐劑性關節(jié)炎大鼠模型藥效學實驗，以及膠原誘導性關