使用尿液流式細(xì)胞儀UF-1000i進(jìn)行尿液細(xì)菌計數(shù)的研究.pdf

1、目的：評價尿液流式細(xì)胞分析儀UF-1000i測定尿液細(xì)菌數(shù)的準(zhǔn)確性；用全自動尿液流式細(xì)胞分析儀UF-1000i確立尿液細(xì)菌數(shù)的參考區(qū)間，為臨床上尿路感染的診斷、用藥以及療效的觀察等提供幫助。
　　 方法：(1)用標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922(大腸埃希菌)和ATCC25923（金黃色葡萄球菌）制成一定濃度的菌懸液，選擇103～108cfu/ml濃度同時用UF-1000i和細(xì)菌培養(yǎng)檢測其中的菌落數(shù)，對UF1000i進(jìn)行線性評價，選擇1

2、03～105cfu/ml的濃度對其進(jìn)行準(zhǔn)確性和精密性評價，選擇105cfu/ml用SPSS16.0進(jìn)行準(zhǔn)確性評價。選擇16SrDNA基因的保守區(qū)作為靶基因確定細(xì)菌的通用引物，利用SYBRGreenⅠ熒光染料建立RQ-PCR反應(yīng)體系。采用含靶基因特異性擴(kuò)增片段的重組質(zhì)粒建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而對不同濃度的E.col樣品進(jìn)行細(xì)菌定量，并對其準(zhǔn)確性進(jìn)行評價。模擬服用抗生素及含有死菌的標(biāo)本，分別用UF-1000i、細(xì)菌培養(yǎng)法和實時熒光PCR法細(xì)菌計數(shù)

3、從分子水平評價UF-1000i；(2)收集263份(133男性，130女性)正常人中段尿，用UF-1000i檢測其細(xì)菌數(shù)和電導(dǎo)率，用全自動生化分析儀測定其肌酐濃度。依照CLSI指導(dǎo)文件規(guī)定確立尿液細(xì)菌數(shù)參考區(qū)間，并建立用肌酐濃度和電導(dǎo)率校正后的尿液細(xì)菌數(shù)參考區(qū)間。收集87份門診病人中段尿，以培養(yǎng)法為“金標(biāo)準(zhǔn)”評價用UF1000i所建立的三個參考區(qū)間。
　　 結(jié)果：(1)UF-1000i在檢測ATCC25922和ATCC25923

4、時的線性范圍在103～107cfu/ml之間，精密性CV值平均為12.3％，培養(yǎng)法為22.3％。培養(yǎng)法和UF1000i所測定的細(xì)菌數(shù)無顯著性差異(p＞0.05)。實時熒光定量PCR法，其精密性CV值平均為13.2％。培養(yǎng)法和RQ-PCR所測定的細(xì)菌數(shù)無顯著性差異(p＞0.05)。模擬服用抗生素和含有死菌的標(biāo)本，UF1000i、RQ-PCR、培養(yǎng)法測定的準(zhǔn)確性分別為110.5％、89.6％、111.3％、76.9％、50.1％和0％。(2

5、)男性的尿液細(xì)菌數(shù)，肌酐校正后細(xì)菌數(shù)及電導(dǎo)率校正后細(xì)菌數(shù)的參考區(qū)間上限分別為23.3個/ul,2.0個/mmolCr和1.4個cm/ulms，女性的分別為353.8個/ul,49.5個/mmolCr和28.1個cm/ulms。87份門診病人用培養(yǎng)法和UF1000i測定所得結(jié)果無顯著性差異(P＞0.05)。UF1000i細(xì)菌計數(shù)參考區(qū)間診斷尿路感染的特異度為87.5％，靈敏度為80％，約登指數(shù)為0.675；電導(dǎo)率校正后的參考區(qū)間特異度為8