花臉香蘑(Lepista sordida)人工栽培及多糖結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、花臉香蘑（Lepista sordida）香味濃郁，味道鮮美，是一種具有較高食用與藥用價(jià)值的珍貴食用菌，能夠進(jìn)行人工栽培，但由于技術(shù)不成熟，產(chǎn)量不高，尚未進(jìn)行大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。多糖是食用菌中最廣為人知、最有效的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性物質(zhì)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)對(duì)700多種擔(dān)子菌的多糖進(jìn)行了研究，相比之下，花臉香蘑多糖的研究才剛剛開(kāi)始。本文探索了花臉香蘑高產(chǎn)栽培模式，篩選出高產(chǎn)配方，為早日實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù);進(jìn)行多糖提取工藝研究，優(yōu)化出最佳

2、提取工藝條件，并對(duì)分離純化后得到的子實(shí)體多糖進(jìn)行初步結(jié)構(gòu)分析，以期為花臉香蘑多糖資源的開(kāi)發(fā)利用打下良好的基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1、首先對(duì)野生香蘑產(chǎn)量較大的齊齊哈爾市甘南縣雙河農(nóng)場(chǎng)、牡丹江市鏡泊湖自然風(fēng)景區(qū)和牡丹江三道關(guān)自然保護(hù)區(qū)等三地的生態(tài)環(huán)境進(jìn)行了調(diào)查和香蘑子實(shí)體采集，并對(duì)采集的子實(shí)體進(jìn)行了菌種分離，獲得3個(gè)菌株，編號(hào)分別為S1（齊齊哈爾）、J1（鏡泊湖）和M1（三道關(guān)）。在對(duì)這3個(gè)菌株依據(jù)子實(shí)體形態(tài)特征進(jìn)行初步分類鑒定

3、的基礎(chǔ)上，從基因的GeneBank中選取了15個(gè)香蘑屬菌株及1個(gè)栓菌屬菌株，與3個(gè)菌株的ITS序列進(jìn)行比對(duì)并建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示，包括J1和M1在內(nèi)的9個(gè)紫丁香蘑菌株聚為一類，且彼此之間遺傳距離較短，而包括S1在內(nèi)的9個(gè)花臉香蘑菌株聚為一類，且遺傳距離也很接近，由此確定，J1和M1為紫丁香蘑，S1是花臉香蘑。
　　2、進(jìn)行了花臉香蘑大棚覆土與仿野生兩種出菇方式對(duì)比的栽培試驗(yàn)研究，結(jié)果顯示，兩者覆土后至現(xiàn)蕾時(shí)間相同，出菇時(shí)溫度條

4、件也接近;大棚內(nèi)產(chǎn)出的花臉香蘑比較粗壯，沒(méi)有香味，仿野生栽培的子實(shí)體比較單薄，與野生采集的相近，有的具備其特有的香氣;仿野生栽培產(chǎn)量高于大棚覆土栽培，前者生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為36.8％，后者僅為17.38％。然后進(jìn)行了配方對(duì)比試驗(yàn)研究，結(jié)果表明，隨著玉米芯添加比例的增加，菌絲生長(zhǎng)速度呈上升趨勢(shì)，添加比例最大的配方六菌絲生長(zhǎng)速度最快，達(dá)到了3.95mm/d，而配方三（木屑48％，玉米芯32％，麥麩18％，石膏1％，石灰1％）的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高，

5、為28.4％。
　　3、以人工栽培的花臉香蘑分離獲得的菌株為研究對(duì)象，對(duì)菌絲體進(jìn)行碳源和氮源利用能力試驗(yàn)，通過(guò)比較菌絲體麥角固醇含量可以發(fā)現(xiàn)，果糖、甘露糖、纖維二糖、蔗糖、葡萄糖和麥芽糖都可以作為花臉香蘑菌絲體生長(zhǎng)的碳源，但相比之下，果糖、甘露糖和纖維二糖是更為理想的碳源;比較多糖產(chǎn)量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，選擇果糖作為碳源，多糖產(chǎn)量最高;丙氨酸、甘氨酸、黃豆粉和蛋白胨都可以作為氮源使用，添加丙氨酸的培養(yǎng)基中，菌絲生長(zhǎng)效果最好;而含有黃豆粉的培

6、養(yǎng)基中，則是多糖產(chǎn)量最高;尿素則不能被花臉香蘑菌絲所利用。
　　4、以齊齊哈爾雙河農(nóng)場(chǎng)采集的野生花臉香蘑子實(shí)體為材料，進(jìn)行了熱水浸提法提取多糖試驗(yàn)，通過(guò)單因素試驗(yàn)研究了浸提時(shí)間、浸提溫度、料水比、提取次數(shù)對(duì)多糖得率的影響，并在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交試驗(yàn)獲得最佳提取工藝。結(jié)果顯示，影響花臉香蘑多糖提取率各因素大小順序?yàn)椋崛囟龋玖纤龋咎崛r(shí)間，提取溫度影響最大，其次是料水比，且差異性顯著(P＜0.01)。同時(shí)優(yōu)化出熱水提取

7、花臉香蘑子實(shí)體多糖最佳工藝條件為:浸提溫度65℃、浸提時(shí)間5h、料水比1∶40(g/mL)，在該條件下多糖得率高達(dá)10.39％，RSD僅為1.33％，證明優(yōu)化實(shí)驗(yàn)獲得的工藝條件重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行。
　　5、以馴化栽培的花臉香蘑菌絲體為原料，進(jìn)行了熱水浸提法提取多糖試驗(yàn)，通過(guò)單因素試驗(yàn)研究了浸提時(shí)間、浸提溫度、液料比、提取次數(shù)對(duì)多糖得率的影響，并在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交試驗(yàn)獲得最佳提取工藝。結(jié)果表明，影響花臉香蘑多糖提取率各因

8、素大小順序?yàn)?，提取溫度＞提取時(shí)間＞液料比，提取溫度對(duì)多糖提取率影響最大，且差異顯著，提取時(shí)間影響在其次。同時(shí)優(yōu)化出熱水提取花臉香蘑菌絲體多糖最佳工藝條件為:浸提溫度95℃、浸提時(shí)間3h、料液比1∶40(g/mL)，在該條件下提取多糖，得率高達(dá)9.41％，RSD僅為1.45％，證明優(yōu)化實(shí)驗(yàn)獲得的工藝條件重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行。
　　6、采用熱水浸提、乙醇濃度分別為30％、60％和80％情況下分步進(jìn)行醇沉的方法提取野生花臉香蘑子實(shí)體粗多糖

9、，得到3種多糖組分，分別命名為L(zhǎng)SP-30、LSP-60和LSP-80，它們的總糖含量分別為64.0％，41.4％和17.2％。進(jìn)一步研究顯示，多糖LSP-30主要由甘露糖(Man)，葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)三種單糖組成，含量分別為23.0％、49.2％和27.8％;用Sephrose CL-6B層析柱根據(jù)分子量不同對(duì)LSP-30進(jìn)行分級(jí)純化，得到LSP-30-a和LSP-30-b兩個(gè)級(jí)分，分子量分別約為600KDa和10KD

10、a。LSP-60主要由Man、Glc、和Gal三種單糖組成，它們的含量分別為31.6％、46.4％和22.0％;用Sephadex G-75層析柱對(duì)LSP-60進(jìn)行純化，結(jié)果表明LSP-60分子量分布范圍較廣且不均一，分子量約為1KDa。LSP-80主要由Man、Glc、Gal和Rha（鼠李糖）四種單糖組成，含量分別為17.4％、68.0％、11.6％和3.0％;用Bio-Gel P-2層析柱根據(jù)分子量不同對(duì)LSP-80進(jìn)行分級(jí)純化，得

11、到LSP-80-a、LSP-80-b和LSP-80-c三個(gè)級(jí)分，分子量分別為1KDa，700Da和400 Da。對(duì)LSP-80-a，LSP-80-b，LSP-80-c的單糖組成進(jìn)行分別測(cè)定，結(jié)果表明，LSP-80-a主要由Man，Glc，Gal組成，含量分別為44.9％、34.4％和20.7％; LSP-80-b主要由Man，Glc，Gal，Rha組成，含量分別為20.5％、60.3％、16.4％和2.8％; LSP-80-c由Man，