小麥花粉特異性基因TaPSG719真核熒光表達(dá)載體的構(gòu)建和亞細(xì)胞定位.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾淖魑镏?。盡管配子體發(fā)育的分子生物學(xué)研究在雜交育種方面具有深遠(yuǎn)的意義,但目前對(duì)它的研究很少。小麥花粉特異性基因TaPSG719在開花的前5天開始表達(dá),表達(dá)量在花粉發(fā)育的中期迅速增長,在開花的前4天達(dá)到最大值,在花粉成熟后表達(dá)量迅速下降。雖然生物信息數(shù)據(jù)庫中已有其mRNA序列,但是有關(guān)該基因編碼蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及細(xì)胞定位目前仍不清楚。
　　本論文構(gòu)建了真核熒光表達(dá)載體pAct1Is-mut-GFP-TaPSG71

2、9,為TaPSG719基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)提供了基礎(chǔ),并對(duì)該基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了細(xì)胞定位。用pAct1Is-mut-GFP作為載體,構(gòu)建TaPSG719基因的真核熒光表達(dá)載體,并成功的將pAct1Is-mut-GFP-TaPSG719載體在洋蔥表皮細(xì)胞中獲得瞬時(shí)表達(dá),驗(yàn)證了所構(gòu)建的真核熒光表達(dá)載體在真核細(xì)胞中表達(dá)的可行性。在經(jīng)過基因槍轉(zhuǎn)化的洋蔥表皮細(xì)胞中,只能在其細(xì)胞壁上看到綠色熒光,推測(cè)TaPSG719基因只在細(xì)胞壁中表達(dá),可能與細(xì)胞

3、壁的形成有關(guān)。
　　在載體構(gòu)建過程中,摸索了載體構(gòu)建過程中的條件,豐富了載體構(gòu)建過程中的實(shí)驗(yàn)參數(shù),提高了實(shí)驗(yàn)的成功率。在TaPSG719基因的兩端分別引入了AccI和NcoI酶切位點(diǎn),并且把TaPSG719基因中間的AccI和NcoI兩個(gè)酶切位點(diǎn)運(yùn)用Overlap-PCR的方法進(jìn)行了突變。在真核細(xì)胞中大量表達(dá)TaPSG719蛋白,可以為研究該蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu),進(jìn)而有望闡明蛋白功能的機(jī)制提供材料。這些工作都為將來更為深入的研究TaPS