炎癥加重脂質(zhì)介導(dǎo)的阿霉素腎病大鼠腎臟損害及辛伐他汀腎臟保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、第一部分：幼年大鼠阿霉素腎病模型的復(fù)制目的：復(fù)制幼年大鼠阿霉素腎病模型，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。 方法：4-5周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、阿霉素腎病組(模型組)。一次性尾靜脈注射阿霉素6.5mg/kg體重，建立阿霉素腎病模型。各組分別于注射阿霉素后第2、4、8、12周末處死8只大鼠，觀察24h尿蛋白水平、血清生化指標(biāo)和形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：注射阿霉素2周后，模型出現(xiàn)大量蛋白尿、低白蛋白血癥和高脂血癥，持續(xù)至第12周。模

2、型早期病變呈微小病變型腎病綜合征，從第8周開始出現(xiàn)局灶節(jié)段性腎小球硬化，腎小球硬化進(jìn)行性加重并伴有腎功能不全。 結(jié)論：成功復(fù)制幼年大鼠阿霉素腎病模型，病理改變由微小病變型腎病綜合征發(fā)展為局灶節(jié)段性腎小球硬化癥。 第二部分：SREBP-LDLr途徑在脂質(zhì)介導(dǎo)阿霉素腎病大鼠腎小球硬化過程中的作用研究目的：探討阿霉素腎病大鼠腎小球硬化過程中，脂質(zhì)沉積和膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2(SREBP-2)、低密度脂蛋白受體(LDLr)的

3、作用。 方法：酶比色法檢測腎組織內(nèi)膽固醇含量，油紅O染色檢測腎組織內(nèi)脂肪沉積情況，半定量RT-PCR技術(shù)檢測腎組織LDLr、SREBP-2mRNA表達(dá)，Western-blotting技術(shù)檢測LDLr、SREBP-2蛋白表達(dá)。 結(jié)果：第8周和第12周模型組腎組織內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量呈進(jìn)行性升高，均高于對照組(P＜0.01)，腎組織內(nèi)膽固醇含量和腎小球硬化呈顯著正相關(guān)性(P＜0.01)：LDLr、SREBP

4、-2mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)呈時間依賴性上調(diào)，均高于對照組(P＜0.01)。 結(jié)論：阿霉素腎病大鼠腎臟細(xì)胞內(nèi)膽固醇濃度對LDLr正常反饋調(diào)節(jié)機(jī)制被破壞，導(dǎo)致SREBP-2、LDLr過度表達(dá)，膽固醇可能通過上調(diào)的SREBP-LDLr途徑在腎臟組織大量沉積，加重腎臟損害。 第三部分：炎癥在脂質(zhì)介導(dǎo)阿霉素腎病大鼠腎小球硬化過程中的作用研究目的：探討炎癥在脂質(zhì)介導(dǎo)阿霉素腎病大鼠發(fā)生腎小球硬化過程中的作用。方法：免疫組化法檢測腎組織中

5、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的定位表達(dá)，半定量RT-PCR技術(shù)檢測腎組織IL-1βmRNA的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清和腎組織中IL-1β的水平，Western-blotting技術(shù)檢測腎組織核因子-κB(NF-κB)的表達(dá)。 結(jié)果：第8周和第12周模型組腎臟NF-κB蛋白表達(dá)均高于對照組(P＜0.01)，且呈時間依賴性增強(qiáng)，同時IL-1β mRNA和蛋白表達(dá)及TGF-β1蛋白表達(dá)均高于對

6、照組(P＜0.01)，也呈時間依賴性增強(qiáng)。 結(jié)論：阿霉素腎病大鼠腎臟局部NF-κB活性明顯上調(diào)，伴有以IL-1β表達(dá)升高為主要表現(xiàn)的炎癥狀態(tài)，腎臟局部炎癥狀態(tài)加重腎小球硬化程度。 第四部分：辛伐他汀對阿霉素腎病大鼠腎臟保護(hù)作用的機(jī)制目的：觀察辛伐他汀對阿霉素腎病大鼠的保護(hù)作用并探討其機(jī)制。 方法：在第一部分實驗建立幼年阿霉素腎病大鼠模型的同時，設(shè)立阿霉素腎病辛伐他汀治療組(治療組)。注射阿霉素6d后，每天于固定時

7、間，治療組給予辛伐他汀3mg/kg體重灌胃，對照組和模型組灌注等量生理鹽水，灌胃給藥11周。各組分別于注射阿霉素后第2、4、8、12周末處死8只大鼠，觀察比較各組生化指標(biāo)、形態(tài)學(xué)改變、腎臟脂質(zhì)沉積和炎癥因子表達(dá)情況。結(jié)果：各觀察時間點，治療組和模型組血脂水平無統(tǒng)計學(xué)差異，第4、8周治療組24h尿蛋白水平低于模型組(P＜0.05和P＜0.01)，第12周治療組血清肌酐低于模型組(P＜0.05)，第8周和第12治療組腎小球硬化指數(shù)低于模型組

8、(P＜0.01)，第8、12周治療組腎臟NF-kB、IL-lp和TGF-pl表達(dá)均較模型組低(P＜0.01或P＜0.05)，治療組LDLr、SREBP-2表達(dá)較模型組低(P＜0.01或P＜0.05)，組織內(nèi)膽固醇含量較模型組低(P＜0.01或P＜0.05)。 結(jié)論：辛伐他汀可以不依賴于其降血脂效應(yīng)對阿霉素腎病大鼠發(fā)揮腎臟保護(hù)作用：辛伐他汀抑制腎臟局部炎癥反應(yīng)，并可能通過抑制炎癥對SREBP-2、LDLr反饋調(diào)節(jié)機(jī)制的破壞，從而下