小鵝瘟VP3基因工程重組亞單位疫苗Ag16v和Ag10v研制及免疫原性研究.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文小鵝瘟VP3基因工程重組亞單位疫苗Ag16v和Ag10v研制及免疫原性研究姓名：周登春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：程安春汪銘書(shū)20080401四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文出其血清中有中和抗體，弱毒免疫的對(duì)照組青年鵝血清中和抗體峰值出現(xiàn)于49d，峰值大小與Agl6v、Aglov免疫組峰值基本相當(dāng)。從免疫效果(包括MTT、ELISAOD值、中和抗體效價(jià))與免疫劑量的關(guān)系分析，Agl6v和Aglov各免疫組

2、均表現(xiàn)為，高劑量組高于中劑量組，中劑量組高于低劑量組，說(shuō)明Agl6v和Aglov的免疫效果存在劑量相關(guān)性。將同等劑量的Agl6v和Aglov刺激青年鵝機(jī)體產(chǎn)生的免疫效果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，Aglov免疫組在大多時(shí)間點(diǎn)上，顯著或極顯著(P005，P001)高于Agl6v免疫組，這可能與單位質(zhì)量的抗原蛋白內(nèi)，Aglov含抗原決定簇?cái)?shù)目較Agl6v更高有關(guān)，同時(shí)也提示我們，在選擇基因工程重組亞單位疫苗的抗原時(shí)，有必要考慮該段蛋白的大小和抗原決定簇密

3、度的關(guān)系，從而設(shè)計(jì)出更為合理、更高效率的亞單位疫苗。4小鵝瘟病毒VP3基因工程重組亞單位疫苗Agl6v和Aglov對(duì)種鵝免疫原性研究取初產(chǎn)種母鵝200只，平均分成4組，編號(hào)A、B、C、D，取種公鵝50只平均分配到4組混養(yǎng)。將Agl6v以0Smg／R皮下免疫A組種鵝，Agtov以05mg／R皮下免疫D組種鵝，弱毒l羽份／只皮下免疫B組種鵝，O02MPBS05ml／只皮下免疫C組種鵝。于免疫后3d、7d、14d、21d、28d、35d、49

4、d、63d、77d、91d、105d、119d、133d、147d、161d、175d隨機(jī)每組采血10只測(cè)定血清IgG和中和抗體，并取種蛋，每組隨機(jī)取5枚用于卵黃抗體ELISA測(cè)定和中和抗體測(cè)定，其余孵化成雛鵝，而后隨機(jī)每次每組取10只于1日齡口Nd鵝瘟強(qiáng)毒，記錄死亡情況，并于7日齡全部安樂(lè)處死，取肝、十二指腸、直腸做切片鏡檢，統(tǒng)計(jì)保護(hù)率。ELISA測(cè)定OD450值結(jié)果顯示，Agt6v和Aglov免疫的種鵝血清IgG抗體OD450值大幅

5、上升，28d達(dá)峰值，175d仍維持較高水平，所產(chǎn)種蛋均含有較高的IgG抗體，至35d達(dá)到峰值，顯著高于對(duì)照PBS組，弱毒免疫組的種鵝所產(chǎn)種蛋也含有較高的IgG抗體，且至49d時(shí)達(dá)到峰值，與Agl6v和Aglov峰值大小相當(dāng)。中和抗體測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果顯示，Agl6v和Aglov免疫的種鵝于免疫后7d檢出血清中和抗體，35d升至最高，175d仍維持較高水平，在免疫14d后開(kāi)始檢出卵黃中和抗體，并子35d達(dá)到峰值，而弱毒免疫組的種鵝的峰值出現(xiàn)在4

6、9d，其大小與Agl6v相當(dāng)，極顯著(PO01)低于Aglov，PBS免疫組種鵝所產(chǎn)種蛋未檢出中和抗體。攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，Aglov免疫的種鵝21d后其后代開(kāi)始出現(xiàn)90％較高保護(hù)率，而Agl6v、Aglov和弱毒免疫種鵝28d后首次出現(xiàn)100％的保護(hù)率，Agl6v組和Aglov組的100％保護(hù)率一直持續(xù)到種鵝免疫后的147d，弱毒組的100％保護(hù)率持續(xù)到種鵝免疫后的161d，PBS免疫的種鵝后各時(shí)間點(diǎn)的后代未檢測(cè)到保護(hù)率。通過(guò)對(duì)青年鵝和