莫諾苷對(duì)局灶性腦缺血治療時(shí)間窗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、局灶性腦缺血導(dǎo)致?lián)p傷的機(jī)制非常復(fù)雜，目前臨床上除溶栓治療外還沒有有效的治療方法，唯一被批準(zhǔn)用于治療中風(fēng)藥物組織型纖溶酶原激活物（tPA）的治療時(shí)間窗僅為4.5h，因此亟需根據(jù)藥物特異的治療靶點(diǎn)和有效治療時(shí)間窗發(fā)展新的療法，減輕腦缺血造成的損傷。腦損傷后Wnt信號(hào)通路會(huì)被激活，而Wnt信號(hào)通路能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，對(duì)神經(jīng)發(fā)生和血管新生有調(diào)控作用。莫諾苷具有抗炎、抗氧化作用，能夠有效促進(jìn)側(cè)腦室室管膜下區(qū)（SVZ）的神經(jīng)發(fā)生，以及大腦皮層梗死灶周

2、圍區(qū)域內(nèi)血管密度增加。本文通過研究莫諾苷對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的有效治療時(shí)間窗的研究及Wnt信號(hào)通路在再灌注損傷后的時(shí)程變化，為臨床治療缺血性腦損傷以及開發(fā)神經(jīng)保護(hù)性藥物提供新的思路。
　　目的：探究莫諾苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠的有效治療時(shí)間窗及腦缺血后Wnt信號(hào)通路的時(shí)程變化。
　　方法：采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，栓塞30min后再灌注，術(shù)后隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、莫諾苷30 mg·kg-1、

3、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量組，分別于缺血再灌注后1d、3d開始灌胃給藥7天。通過檢測(cè)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、腦梗死體積以及神經(jīng)發(fā)生、血管發(fā)生相關(guān)蛋白的表達(dá)，來研究不同給藥時(shí)間莫諾苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠的治療作用。同時(shí)，采用該動(dòng)物模型，Western Blotting法觀察術(shù)后3h、6h、12h、24h以及3d、7d、14d、28d Wnt信號(hào)通路Wnt3a和β-catenin蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　

4、　1.神經(jīng)功能評(píng)分：Zea Longa評(píng)分結(jié)果顯示，MCAO造模8d和10d后，大鼠的行為學(xué)評(píng)分比假手術(shù)組顯著增加(P<0.001, P<0.001)。缺血再灌注后1d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較,莫諾苷270 mg·kg-1劑量組能顯著降低大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分(P<0.01)；而缺血再灌注后3d開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，莫諾苷30 mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對(duì)大鼠的行為學(xué)無明顯改善作用。

5、r>　　2.腦梗死體積測(cè)定：MCAO造模8d和10d后，與假手術(shù)組相比，模型組的腦梗死體積顯著增加(P<0.001，P<0.001)。缺血再灌注后1d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較，莫諾苷270 mg·kg-1劑量組顯著減小大鼠的腦梗死體積(P<0.05)。缺血再灌注后3d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較，莫諾苷30 mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對(duì)大鼠的腦梗死體積無明顯改善作用。
　　3.神經(jīng)發(fā)生

6、相關(guān)因子表達(dá)的影響：MCAO造模8d后，與假手術(shù)組相比，模型組的Wnt3a和β-catenin表達(dá)都增加(P<0.05，P<0.05),造模10d后，與假手術(shù)組相比，模型組的Wnt3a和β-catenin表達(dá)也都增加(P<0.001，P<0.05)。缺血再灌注1d和3d后開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，缺血再灌注后1d給藥時(shí)，莫諾苷270 mg·kg-1劑量顯著增加Wnt3a和β-catenin的表達(dá)(P<0.01、P<0.01)；缺血

7、再灌注3d后給藥時(shí)，莫諾苷30mg·kg-1、90mg·kg-1、270mg·kg-1劑量對(duì)上述指標(biāo)均無顯著增加作用。
　　4.血管發(fā)生相關(guān)因子表達(dá)的影響：MCAO造模8d后，與假手術(shù)組相比，模型組的CD34和Ang-1表達(dá)均增加(P<0.05，P<0.05),造模10d后，與假手術(shù)組相比，模型組的CD34和Ang-1表達(dá)也都增加(P<0.001，P<0.01)。缺血再灌注1d和3d后開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，缺血再灌注后1

8、d給藥時(shí)，莫諾苷270 mg·kg-1劑量顯著增加CD34和Ang-1的表達(dá)(P<0.05、P<0.01)，其中莫諾苷90 mg·kg-1就能顯著增加 Ang-1的表達(dá)(P<0.05)。缺血再灌注3d后給藥時(shí)，莫諾苷30mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對(duì)上述指標(biāo)均無顯著增加作用。
　　5.Wnt信號(hào)通路時(shí)程變化：造模后Wnt3a和β-catenin的表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化。Wnt3a從腦缺血后3h開始蛋白表

9、達(dá)增多，直至1d時(shí)達(dá)到表達(dá)高峰(P<0.001)，隨后在3d、7d、14d時(shí)雖有下降，但表達(dá)量水平仍顯著高于假手術(shù)水平（P<0.01、P<0.001、P<0.05)，14d與7d相比較時(shí)表達(dá)量下降（P<0.01），直至28d時(shí)表達(dá)無顯著性差異。β-catenin蛋白的表達(dá)在12h時(shí)降低（P<0.01），在1d、3d、7d、14d時(shí)表達(dá)均增多(P<0.001、P<0.001、P<0.001、P<0.05)，28d時(shí)與假手術(shù)相比無差異。