腺苷A1型和A3型受體在運動預(yù)處理心臟保護效應(yīng)中的作用.pdf

1、目的：本研究通過建立大鼠離體模擬缺血-再灌注(I/R)心臟模型，觀察腺苷A1型受體(A1AR)拮抗劑8-環(huán)戊基-1，3-二丙基黃嘌呤(DPCPX)和腺苷A3型受體(A3AR)拮抗劑MRS1191預(yù)處理對短期運動大鼠離體心臟功能、心肌壞死標(biāo)記物、心肌梗死面積影響。探討A1AR和A3AR是否介導(dǎo)短期運動預(yù)處理對離體大鼠心臟I/R損傷的保護作用及其可能分子機制。
　　方法：1、將120只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分

2、為靜坐和運動兩大組，又分為6個亞組：靜坐(sedentary，Sed)+二甲基亞砜組(DMSO)(Sed組)，Sed+DPCPX組(Sed+D組)，Sed+MRS1191組(Sed+M組)，運動(exercise training，ET)+DMSO組(ET組)，ET+DPCPX組(ET+D組)，ET+MRS1191組(ET+M組)，每組20只。運動組大鼠在動物跑步機上先預(yù)適應(yīng)5天(速度是15米/分鐘，時間從第1天至第5天依次為5分鐘、1

3、5分鐘、25分鐘、35分鐘及45分鐘)，休息2天后，再連續(xù)5天，每天以15米/分鐘速度先運動10分鐘，再以30米/分鐘速度運動40分鐘，最后再以15米/分鐘速度運動10分鐘，共一小時。而靜坐組則在靜止的跑步機上自由活動相同時間。在最后一次運動結(jié)束后24小時殺死兩組動物取心臟，做離體灌注。
　　2、6個亞組各取10只動物，采用Langendorff離體心臟灌流模型，灌注過程中將一連接于壓力傳感器的充水水囊經(jīng)肺靜脈口進入左心房，經(jīng)二尖

4、瓣口插入左心室，以進入左室后LVEDP5-15mmHg為充水水囊充水后的壓力標(biāo)準(zhǔn)，通過生物信號采集器測量心功能各項指標(biāo)。平衡穩(wěn)定10分鐘后，各組離體心臟分別分別用DMSO、0.1uM DPCPX及1.0 uM MRS-1191預(yù)處理20分鐘，接著停灌30分鐘，再灌注120分鐘；分別于缺血前、再灌注30分鐘、120分鐘記錄心率(HR)、左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末壓(LVEDP)、左心室壓變化最大速率(±dp/dtmax)。同時

5、各組在再灌注15分鐘時留取冠脈流出液待測乳酸脫氫酶(LDH)釋放量。再灌注結(jié)束后，TTC染色法測定各組心臟的心肌梗死面積。
　　3、另外60只大鼠離體心臟同上述方法接I/R，然后對肌漿部分肌漿ATP敏感性鉀離子通道(sarcKATP通道)亞單位含量進行測量。除死大鼠，將導(dǎo)管插入心臟，同上述I/R方法對其逆行灌注，唯一不同是不需要將充水水囊插入心臟來測量心功能。最后，取下心臟，進行細(xì)胞亞單位分離，用免疫印跡法(Western blo

6、t)測定sarcKATP通道兩個亞單位kir6.2和SUR2蛋白含量。
　　結(jié)果：1、缺血前，所有實驗組離體心臟功能的各種參數(shù)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。再灌注時靜坐各亞組之間各血流動力學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與靜坐組比較，運動預(yù)處理能夠不同程度提高再灌注時除HR之外各血流學(xué)參數(shù)(P<0.05)，而MRS1191預(yù)處理能夠部分抵消運動預(yù)處理的這種心臟保護作用，表現(xiàn)為除HR之外各血流學(xué)參數(shù)數(shù)值下降(P<0.05)。
　　2、靜坐各亞組

7、之間，不可逆I/R損傷造成的梗死面積差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。與靜坐組比較，運動預(yù)處理能夠不同程度減少梗死面積(P<0.05)，但是MRS1191預(yù)處理而不是DPCPX能夠部分拮抗運動預(yù)處理的這種心臟保護作用，具體表現(xiàn)為梗死面積增大(P<0.05)。
　　3、靜坐各亞組之間，冠脈流出液中LDH釋放量沒有顯著性差異。與靜坐組比較，運動組LDH釋放量明顯減少(P<0.05)，但MRS1191預(yù)處理能夠部分抵消運動預(yù)處理的心臟保護作用，表現(xiàn)為

8、LDH釋放量增加(P<0.05)。
　　4、靜坐各亞組之間，肌漿部分Kir6.2和SUR2a含量沒有顯著性差異。與靜坐組比較，運動組肌漿亞單位Kir6.2和SUR2a含量顯著增加(P<0.05)，但MRS1191預(yù)處理能夠中和運動預(yù)處理誘導(dǎo)的肌漿Kir6.2和SUR2a含量上調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.A3AR拮抗劑MRS1191預(yù)處理，能夠部分取消短期運動預(yù)處理的心臟保護作用。而A1AR拮抗劑DPCPX沒有該作用。