胃泌素-胃泌素受體環(huán)在多種腫瘤中的表達(dá)及阻斷此環(huán)對細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的: 研究胃泌素（gastrin，GAS）和胃泌素受體（gastrin receptor）在多種腫瘤中的表達(dá)，探討阻斷胃泌素受體對胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌細(xì)胞的增殖凋亡的影響，初步研究胃泌素/胃泌素受體環(huán)作用的信號通路。
　　方法: 應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測多器官癌組織芯片中胃泌素的表達(dá)，同時(shí)檢測臨床標(biāo)本胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌組織切片中胃泌素和胃泌素受體的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)驗(yàn)證檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901、和AGS、肝癌細(xì)胞Hep

2、G2、肺癌細(xì)胞A549、和乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞株中胃泌素和胃泌素受體的表達(dá)；用胃泌素受體阻斷劑丙谷胺分別處理SGC-7901、AGS、HepG2、A549、MCF-7細(xì)胞后，用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖并繪制細(xì)胞生長曲線，Caspase-3酶活性試劑盒檢測各組細(xì)胞的Caspase-3的酶活性，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞周期和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測各組細(xì)胞的凋亡；利用Real-time RT-PCR方法定量檢測

3、丙谷胺處理胃癌SGC-7901和AGS細(xì)胞后對Wnt、NF-κB、PI3K-AKT-MTOR信號通路中關(guān)鍵因子β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、核轉(zhuǎn)錄因子RelA(Nuelear factor-P65,P65)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,MTOR)、糖原合酶激酶3β(glycogen sy

4、nthase kinase3 beta,GSK-3β) mRNAs的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果: 組織芯片檢測發(fā)現(xiàn)胃泌素在食管鱗狀細(xì)胞癌、胃腺癌、結(jié)腸腺癌、肝細(xì)胞性肝癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)陽性，腎癌中表達(dá)陰性；臨床組織標(biāo)本胃腺癌、肝細(xì)胞性肝癌、肺鱗狀細(xì)胞癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中胃泌素和胃泌素受體表達(dá)陽性；其相應(yīng)的體外細(xì)胞株SGC-7901、AGS、HepG2、A549、MCF-7中胃泌素和胃泌素受體的表達(dá)陽性；用丙谷胺

5、阻斷胃泌素受體后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的生長曲線均低于對照組細(xì)胞，Caspase-3酶活性均高于對照組細(xì)胞（P﹤0.05）；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：在AGS、SGC-7901、A549細(xì)胞中，丙谷胺處理組的細(xì)胞其S期細(xì)胞數(shù)低于丙谷胺未處理的對照組細(xì)胞，而G1/G0期細(xì)胞數(shù)高于對照組細(xì)胞（P﹤0.05）；在所有檢測的細(xì)胞中，丙谷胺處理組的細(xì)胞其凋亡細(xì)胞數(shù)高于丙谷胺未處理的細(xì)胞（P﹤0.05）；用丙谷胺阻斷胃泌素受體后，胃癌SGC-7901和AGS細(xì)