久瀉靈顆粒對(duì)脾腎陽虛型潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠TLR4、NF-κBp65及炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　闡明久瀉靈顆粒對(duì)脾腎陽虛型UC模型大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)變化的影響以及對(duì)IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ炎癥因子和TLR4、NF-κB p65蛋白基因表達(dá)的影響，初步闡釋以溫補(bǔ)脾腎法為指導(dǎo)的中藥制劑久瀉靈顆粒治療UC的作用機(jī)理和科學(xué)內(nèi)涵，為臨床治療UC用藥的探討提供有效的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、將60只SPF級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組和模型組，采用灌服大黃水煎液加肌肉注射氫化可的松的方

2、法建立中醫(yī)證型“脾腎陽虛”模型，同時(shí)結(jié)合TNBS（2,4,6-三硝基苯磺酸）加50％乙醇混合灌腸法建立西醫(yī)病“UC”模型。造模成功后將模型組隨機(jī)分為脾腎陽虛型UC模型7天、14天、21天組，取材后進(jìn)行結(jié)腸組織病理切片制備，采用ELISA法檢測(cè)FT3、FT4、T的含量。
　　2、將90只SPF級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組和模型組，造模方法和實(shí)驗(yàn)一相同。造模成功后將模型組隨機(jī)分為脾腎陽虛型UC模型組、久瀉靈顆粒治療7天、14天、2

3、1天組和陽性對(duì)照組（SASP組）。久瀉靈顆粒治療組按各組要求分別給藥7天、14天、21天，陽性對(duì)照組給予柳氮磺胺吡啶治療。取材后選用病理學(xué)方法（肉眼觀察和HE染色鏡下觀察）來觀察各組大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)變化、ELISA法檢測(cè)大鼠血清及組織中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量、免疫組化法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65蛋白表達(dá)、RT-qPCR法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65基因的表達(dá)。
　

4、　結(jié)果：
　　1、ELISA法檢測(cè)大鼠血清中FT3、FT4、T的含量：與空白組比較，模型7天、14天、21天組中FT3、FT4、T的含量均有所降低，其中模型21天組差異顯著（P<0.01）。
　　2、ELISA法檢測(cè)大鼠血清及組織中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量：與空白組比較，UC模型組中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均有所升高，具有顯著性差異（P<0.01）；與模型組比較，久瀉靈顆粒治療

5、7天、14天、21天組及陽性對(duì)照組中各炎癥因子的含量均有所降低（P<0.01或P<0.05），且以中藥治療21天組差異最為顯著（P<0.01）。
　　3、RT-qPCR法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65 mRNA表達(dá)：與模型組比較，空白組結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65 mRNA表達(dá)量明顯低于模型組（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；久瀉靈顆粒治療7天、14天、21天組結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65 m

6、RNA表達(dá)量均有所降低（P<0.01或P<0.05）。
　　4、免疫組化法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中TLR4、NF-κB p65蛋白表達(dá)：
　　TLR4表達(dá)：（1）鏡下觀察可見：模型組大鼠腸粘膜上皮和固有層單個(gè)核細(xì)胞都有TLR4陽性表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度高于空白組，并且越接近腸腔表達(dá)越強(qiáng)。其余各治療組大鼠TLR4呈弱度或中等強(qiáng)度表達(dá)。（2）TLR4陽性細(xì)胞灰度值結(jié)果為：與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織中TLR4表達(dá)顯著增強(qiáng)（P<0.01），

7、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比較，治療后其他各組TLR4表達(dá)均有所減弱（P<0.01或P<0.05）。
　　NF-κB p65表達(dá)：（1）鏡下觀察可見：模型組中NF-κB p65陽性表達(dá)為單核-巨噬細(xì)胞，呈現(xiàn)胞漿陽性，大鼠結(jié)腸粘膜上皮和固有層單個(gè)核細(xì)胞中都可以見到，表達(dá)強(qiáng)度明顯高于空白組。其余各治療組大鼠NF-κB p65陽性細(xì)胞呈弱度或中等強(qiáng)度表達(dá)。（2） NF-κB p65陽性細(xì)胞灰度值結(jié)果為：與空白組比較，模型組NF-κB p

8、65表達(dá)顯著增強(qiáng)（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比較，治療后各組NF-κB p65表達(dá)顯著減弱（P<0.01或P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、脾腎陽虛是UC反復(fù)發(fā)病，病情遷延難愈的關(guān)鍵病機(jī)，以溫補(bǔ)脾腎法為指導(dǎo)的久瀉靈顆粒治療UC療效顯著，為臨床用藥提供了有效依據(jù)。
　　2、久瀉靈顆?？梢悦黠@降低脾腎陽虛型UC模型大鼠血清及結(jié)腸組織中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ炎癥因子的含量，進(jìn)而抑制炎性