下調(diào)CD133表達對肝癌細胞HUH7、腦膠質(zhì)瘤細胞U251及惡性黑色素瘤細胞D375體外生長的影響.pdf

1、目的：探討腫瘤干細胞(CSCs)表面標記物，5次跨膜蛋白CD133(又名Prominin-1)的功能及對三種腫瘤細胞系：Huh7，U251和A375體外生長特性的影響，并分析其同家族蛋白Prominin-2是否有類似或協(xié)同的功能。
　　 方法：選取人肝癌細胞系Huh7、人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251及人惡性黑色素瘤細胞系A375為研究對象，采用CD133/Prominin-1 反義寡核苷酸(ASODN)及無關寡核苷酸(NSODN)分別

2、轉(zhuǎn)染以上三種細胞。RT-RCR檢測CD133 mRNA 水平，流式細胞儀檢測CD133表達和細胞周期分布，集落形成實驗檢測細胞集落形成能力，活細胞計數(shù)法計算細胞生長。同上法，加以Prominin-2 ASODN轉(zhuǎn)染Huh7細胞，并檢測細胞集落形成能力變化。
　　 結果：在CD133/Prominin-1 ASODN轉(zhuǎn)染的各細胞系中，ASODN組細胞與空白對照組及NSODN組相比，其CD133 mRNA 水平均明顯降低(P＜0.0

3、5)。其中在Huh7細胞中，ASODN組細胞表面CD133表達率明顯降低(P＜0.05)，細胞集落形成率也相應明顯降低(P＜0.005)，細胞周期中ASODN組S期比例顯著增高(P＜0.05)，細胞G0-G1期比例較NSODN組細胞略低，但差異無顯著性(P＞0.05)。在U251細胞中，ASODN組與空白對照組及NSODN組相比，第14 天細胞數(shù)量明顯較少(P＜0.05)。而在A375細胞中，ASODN組細胞集落形成率與空白對照組及NS

4、ODN組相比并無明顯差異。另外，在以Prominin-2 ASODN轉(zhuǎn)染的Huh7細胞中，ASODN組細胞集落形成率較對照組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結論：ASODN轉(zhuǎn)染下調(diào)CD133/Prominin-1表達可使Huh7細胞的集落形成能力顯著下降，且可對Huh7細胞周期的分布產(chǎn)生一定影響；可顯著抑制人腦膠質(zhì)瘤細胞U251的體外增殖；但對人惡性黑色素瘤細胞A375的集落形成能力無明顯影響。而Prominin-2 AS