內(nèi)皮保護(hù)劑治療川崎病的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：異種動(dòng)物蛋白誘導(dǎo)川崎病兔模型的制作及評(píng)價(jià)
　　目的：
　　探討通過耳緣靜脈重復(fù)注射異種動(dòng)物蛋白誘導(dǎo)幼兔產(chǎn)生冠狀動(dòng)脈炎，驗(yàn)證其與川崎病冠狀動(dòng)脈病變的相似性，為研究川崎病提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　方法：
　　20只4-6周齡的日本大耳幼兔隨機(jī)分為模型組和對(duì)照組。兩組分別給予10%牛血清白蛋白和生理鹽水，第1天、第14天各重復(fù)注射一次。在首次注射后的第六周，兩組幼兔分別行冠脈造影，并在造影結(jié)束后一小時(shí)之內(nèi)顯微鏡下分

2、離冠狀動(dòng)脈行組織病理學(xué)檢測(cè)和超微結(jié)構(gòu)的電鏡觀察，并留取肝臟、腎臟、肺臟及脾臟行組織病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果：
　　(1)冠脈造影：僅模型組發(fā)現(xiàn)3只兔的冠狀動(dòng)脈出現(xiàn)不同程度的擴(kuò)張或狹窄（3/10）；
　　(2)組織病理學(xué)：模型組所有幼兔冠狀動(dòng)脈均出現(xiàn)內(nèi)皮增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，不連續(xù)的冠脈內(nèi)皮；肺組織、腎臟組織呈現(xiàn)肉芽腫樣改變主要由單核細(xì)胞組成，且肺組織病變部位小血管腔幾乎完全被阻塞，部分肺泡塌陷，肺泡水腫不明顯；肝臟組織出現(xiàn)

3、點(diǎn)狀壞死，單核細(xì)胞聚集；
　　(3)透射電鏡結(jié)果：模型組兔冠狀動(dòng)脈部分內(nèi)彈力膜斷裂，內(nèi)皮不連續(xù)，伴有內(nèi)皮細(xì)胞脫落和中層平滑肌細(xì)胞腫脹變性。
　　結(jié)論：
　　本研究證實(shí)牛血清白蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生的兔免疫性冠狀動(dòng)脈炎，類似川崎病冠狀動(dòng)脈炎改變，可作為模擬川崎病冠狀動(dòng)脈損傷的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　第二部分：辛伐他汀治療川崎病的作用及其機(jī)制研究
　　目的：
　　內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)劑尚未作為川崎病的常規(guī)治療手段，本研究擬在川崎病

4、幼兔模型上，給予內(nèi)皮保護(hù)劑辛伐他汀干預(yù)后，觀察其對(duì)川崎病的發(fā)病、病理改變及對(duì)內(nèi)皮功能的影響，并探討其中的機(jī)制，從而為從內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的角度防治川崎病提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組：將30只日本大耳幼兔隨機(jī)分為模型組、辛伐他汀干預(yù)組、對(duì)照組三組。模型組及辛伐他汀干預(yù)組均予耳緣靜脈注射牛血清白蛋白（10%，3ml/kg），對(duì)照組給予生理鹽水（3ml/kg），第1天、第14天各重復(fù)注射一次。辛伐他汀干預(yù)組于第2次

5、注射后連續(xù)三周每天予辛伐他汀干預(yù)（5mg/kg.d）灌胃；三組分別于第2次注射后第7、14、21天（即急性期、亞急性期、恢復(fù)期）分別采血一次。
　　2.檢測(cè)方法：
　?。?）評(píng)價(jià)建模成功的方法：
　　①組織病理學(xué)檢測(cè)各組幼兔的心肌及冠脈組織改變情況；
　?、诟鹘M幼兔行冠狀動(dòng)脈造影檢查；
　?。?）ELISA法檢測(cè)血漿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的表達(dá)；
　?。?）流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法測(cè)定各組幼兔血漿內(nèi)

6、皮微顆粒（CD62E+EMPs、CD105+EMPs、CD144+/CD42b-EMPs）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.組織病理學(xué)結(jié)果：模型組和辛伐他汀干預(yù)組均出現(xiàn)不同程度的炎癥浸潤(rùn)。模型組可見血管內(nèi)膜局部明顯增厚，冠脈內(nèi)皮不連續(xù)；而辛伐他汀干預(yù)組幼兔冠狀動(dòng)脈炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較輕，內(nèi)膜增厚不明顯；對(duì)照組冠脈內(nèi)皮光滑連續(xù)。
　　2.eNOS水平：辛伐他汀干預(yù)組eNOS表達(dá)水平低于模型組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；辛

7、伐他汀干預(yù)組eNOS表達(dá)水平與對(duì)照組相比，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.辛伐他汀干預(yù)組KD幼兔急性期、亞急性期、恢復(fù)期血漿EMPs表達(dá)水平與模型組和對(duì)照組的比較：
　?。?）辛伐他汀干預(yù)組及模型組三種表型的EMPs表達(dá)水平均高于對(duì)照組，P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　?。?）辛伐他汀干預(yù)組與模型組進(jìn)行比較：
　?、貱D62E+EMPs、CD105+EMPs水平比較：辛伐他汀干預(yù)組表達(dá)均低于模

8、型組，P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　?、贑D144+/CD42b-EMPs：急性期辛伐他汀干預(yù)組表達(dá)低于模型組（P=0.001）P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而亞急性期（P=0.199）恢復(fù)期（P=0.096）辛伐他汀干預(yù)組EMPs表達(dá)低于模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.模型組幼兔血漿EMPs表達(dá)水平：
　?。?）CD62E+EMPs：急性期明顯高于亞急性期、恢復(fù)期(P均＜0.05)差異有統(tǒng)計(jì)

9、學(xué)意義；亞急性期與恢復(fù)期比較，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　?。?）CD105+EMPs：急性期高于恢復(fù)期（P＜0.05）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；急性期與亞急性期比較及亞急性期與恢復(fù)期比較，P均＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　（3）CD144+/CD42b-EMPs：恢復(fù)期表達(dá)高于急性期和亞急性期，亞急性期表達(dá)高于急性期，P均＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.辛伐他汀可以降低內(nèi)皮微顆粒的釋放