川崎病調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群異常機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：探討川崎病(Kawasaki Disease，KD)患兒調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群的異常機(jī)制。
　　方法：急性期KD患兒48例，同年齡健康兒童28例為對(duì)照組。KD患兒分別于治療前、后取血備檢。
　　1.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血IL-35+Breg、Treg比例及PD-L1、CD169、PD-1、CD43、IL-12p35、IL-27EBI3、IL-12Rβ2、IL-27Rα、pSTAT1、pSTAT3、IL-10、TGF-β、CT

2、LA4、STUB1、HSP70、USP7表達(dá)水平；
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)SHP-2、PTEN、Vav、IL-1R1、IL-1RAP、IL-6Rα、gp130、TNFR1、MyD88、RIP1 mRNA表達(dá)；
　　3.采用免疫共沉淀-印跡法檢測(cè)Foxp3蛋白泛素化水平；
　　4. ELISA檢測(cè)血漿IL-1β、IL-6、IL-12、IL-35、TNF-α濃度；
　　結(jié)果：1.急性期KD患兒外周血IL-35

3、+Breg及胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3、IL-10表達(dá)明顯降低（P<0.05），治療后明顯上調(diào)（P<0.05）；
　　2. Treg比例及胞內(nèi) IL-12p35、IL-27EBI3、IL-10、TGF-β、CTLA4、Foxp3表達(dá)顯著下調(diào)， Foxp3蛋白泛素化水平顯著增加，治療后明顯恢復(fù)（P<0.05）。其中IL-35+Breg和Treg比例呈正相關(guān)(r=0.69，P<0.05)。KD合并冠脈損傷組（KD-CAL

4、+）Treg比例及IL-10、TGF-β、CTLA4、Foxp3表達(dá)均低于無冠脈損傷組（KD-CAL-），F(xiàn)oxp3蛋白泛素化水平則高于后者，治療后均明顯恢復(fù)（P<0.05）。
　　3.急性期KD患兒血漿IL-35濃度明顯降低，TNF-α、IL-12濃度及CD14細(xì)胞PD-L1、CD169表達(dá)顯者增加，CD19細(xì)胞IL-12Rβ2/IL-27Rα/pSTAT1/pSTAT3、PD-1/SHP-2/PTEN、CD43/Vav表達(dá)明顯

5、高于對(duì)照組，治療后明顯恢復(fù)（P<0.05）。
　　4.急性期KD患兒CD4細(xì)胞USP7表達(dá)明顯降低，STUB1、HSP70表達(dá)及STUB1/USP7比值顯著升高，且比值與Foxp3蛋白水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.56, P<0.05），治療后均不同程度恢復(fù)(P<0.05)。其中KD-CAL+組USP7表達(dá)則明顯低于KD-CAL-組,而STUB1、HSP70表達(dá)及STUB1/USP7比值均高于后者(P<0.05)。
　　5.急性期

6、 KD患兒血漿 IL-1β、IL-6、TNF-α濃度及 CD4細(xì)胞IL-1R1/IL-1RAP/TLR4/MyD88、IL-6Rα/gp130/pSTAT3、TNFR1/RIP1表達(dá)顯著上調(diào)，且 KD-CAL+組前述各項(xiàng)均高于 KD-CAL-組，治療后明顯降低（P<0.05）。其它TLR表達(dá)無改變（P>0.05）。
　　結(jié)論：急性期KD患兒IL-35+Breg數(shù)量及功能異?？赡苁菍?dǎo)致其免疫功能紊亂的重要因素之一，而Treg數(shù)量減少