中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的QuEChERS-液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)分析.pdf

1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物由于所用人群特殊，個(gè)體差異大，治療指數(shù)低，長(zhǎng)期應(yīng)用易產(chǎn)生依賴(lài)性，出現(xiàn)中毒事件頻率較高。因此，臨床毒物分析對(duì)人體內(nèi)的毒物進(jìn)行定性和定量分析，對(duì)于急性中毒病人的診治和預(yù)防控制具有重要意義。本課題以成癮性鎮(zhèn)痛藥、麻醉藥、抗精神病藥、苯二氮卓類(lèi)等60種主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物作為研究對(duì)象，研究QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）技術(shù)應(yīng)用于中毒患者血漿樣品前處理方法，并

2、采用超高效液相色譜-光電二極管陣列（UPLC-PDA）及超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-MS）進(jìn)行篩查，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)未知藥物的快速定性、定量檢測(cè)。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、沤⒅卸痉治龅难獫{樣品預(yù)處理QuEChERS方法。取1ml血漿，加入2ml含1％乙酸的乙腈；加入無(wú)水硫酸鎂約250mg，旋渦混勻60s，以7000r/min速度離心5min；取上清液加入到QuEChERS凈化管（含有50 mgC18吸附劑，250 mg無(wú)水硫

3、酸鎂），旋渦混勻混合1 min，10000 r/min離心5 min。上清液供超高效液相色譜及液質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行檢測(cè)。
　　⑵建立基于QuEChERS技術(shù)的同時(shí)檢測(cè)血漿中60種中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物UPLC-PDA方法。樣品處理液采用Agilent ZORBAS Eclipse plus色譜柱(1.8μm,2.1mm×100mm)分離，流動(dòng)相：A：0.1%甲酸；B：0.1%甲酸+甲醇。梯度洗脫程序：0.5-11.5min B從8%上升至74%

4、；11.5-12.5min B從74%上升至98%；12.5-17.5minB從98%降至8%；17.5-18min恢復(fù)初始條件8%B；18-24min平衡6 min。流速：0.4ml/min，溫度為35 ℃；進(jìn)樣體積為5μL；掃描波長(zhǎng)為200-360nm；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。采集60種中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的紫外光譜圖，掃描波長(zhǎng)為200-360nm；聯(lián)合紫外光譜庫(kù)與保留時(shí)間對(duì)待分析物進(jìn)行定性。60種中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物在低、中、高三種濃度的平

5、均回收率均超過(guò)50%，其中濃度為10μg/mL的藥物中，有56種的平均回收率超過(guò)80%；濃度為5μg/mL的藥物中，有51種的平均回收率超過(guò)80%；濃度為1ug/mL的藥物中，有39種藥物的平均回收率超過(guò)80%。6次測(cè)定的RSD（Relative standard deviation）在0.2%-12.9%之間，方法的LOD(Limits of Detection)為0.05-0.83μg/mL。
　?、墙⒒赒uEChERS技

6、術(shù)的同時(shí)檢測(cè)血漿中60種中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物UPLC-MS-MS方法。采用UPLC-MS-MS，通過(guò)優(yōu)化60種藥物的質(zhì)譜條件及參數(shù)，確定了各藥物的特征篩查離子，建立臨床常見(jiàn)中毒藥物的二級(jí)質(zhì)譜庫(kù)。樣品處理液采用Agilent ZORBAS Eclipse plus色譜柱(1.8μm,2.1mm×100mm)分離，以0.1%甲酸+甲醇作為流動(dòng)相，梯度洗脫，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)，52種藥物采用正離子檢測(cè)，8種藥物采用負(fù)離子檢測(cè)。60種藥物的平均回收率在5

7、0.10%-132.40%之間。其中濃度為500μg/L的藥物中，有39種藥物的平均回收率超過(guò)80%；濃度為100μg/L的藥物中，有38種藥物的平均回收率超過(guò)80%；濃度為25μg/L的藥物中，有34種藥物的平均回收率超過(guò)80%。6次測(cè)定的RSD在1.1%-19.1%之間，LOD為0.02-5.00μg/L。對(duì)UPLC-MS-MS方法的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)估，血樣經(jīng)QuEChERS方法處理后，60種藥物絕對(duì)基質(zhì)效應(yīng)不明顯，基質(zhì)效應(yīng)因子在80

8、.6%-118.2%之間。結(jié)果表明UPLC-MS-MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)篩選分析方法兼具有選擇離子掃描的高靈敏度和二級(jí)質(zhì)譜結(jié)構(gòu)特征的高選擇性，可用于系統(tǒng)毒物篩選、確證和定量分析。
　?、妊芯勘砻鳎孩貿(mào)uEChERS方法可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物系統(tǒng)毒物分析通用的樣品前處理方法。②UPLC-PDA掃描方法，方法簡(jiǎn)單，快速，適用于大多數(shù)基層實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)應(yīng)用。UPLC-MS-MS方法兼具有高靈敏度和高選擇性，可用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物中毒的篩查、確