大鼠正常腦組織局部接觸尼莫司汀后相關(guān)功能指標(biāo)變化初探.pdf

1、研究背景:
　　 腦膠質(zhì)瘤占顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的35.26％～60.96％，平均44.69％，是最常見的顱內(nèi)原發(fā)腫瘤。由于其浸潤性生長，與正常腦組織分界不清，手術(shù)根治率低等特點，單純手術(shù)易于復(fù)發(fā)，預(yù)后不佳，尤其膠質(zhì)母細(xì)胞瘤術(shù)后平均生存時間僅3個月。目前，“手術(shù)+放射治療+化學(xué)藥物治療”的綜合治療方案已是學(xué)術(shù)界共識，其中化療是腦膠質(zhì)瘤綜合治療的重要環(huán)節(jié)之一。但常規(guī)的靜脈系統(tǒng)給藥，由于劑量依賴的骨髓抑制、肝毒性、肺纖維化等非靶體部位的毒性

2、作用、以及難以通過血腦屏障(blood-brainbarrier，BBB)等原因致使療效欠佳。針對以上問題，許多學(xué)者就化療方式、給藥方法及途徑等進(jìn)行探索，以期提高治療效果，改善患者生存質(zhì)量。由于膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)多局限于原發(fā)部位，因而局部治療即可在防止或延緩腫瘤復(fù)發(fā)方面發(fā)揮重要作用。
　　 近年興起的Gliasite(I)125球囊間質(zhì)內(nèi)放療局部生物療法、瘤腔內(nèi)注射淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(lymphokineactivatedkille

3、r，LAK)的免疫治療等都是基于膠質(zhì)瘤的生長特點一系列局部治療新方法。其中瘤腔單次給藥是局部化療相對有效方法。以往曾有人在神經(jīng)外科術(shù)中以明膠海綿為載體、將藥物置于瘤腔，得到了較好療效，這種方法具有操作簡單成本低廉、排斥反應(yīng)發(fā)生率低等特點。
　　 已知尼莫司汀(ACNU)局部應(yīng)用于膠質(zhì)瘤治療作用顯著。一般情況下，在應(yīng)用ACNU對膠質(zhì)瘤局部化療藥物中，常以明膠海綿蘸取合理劑量的ACNU溶液局部應(yīng)用于膠質(zhì)瘤區(qū)域，以直接抑制腫瘤細(xì)胞生長

4、、減少全身化療的副作用。但在這種治療過程中，ACNU在對殘余膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷的同時，也難免對周圍正常腦組織產(chǎn)生相關(guān)不良作用，而目前的治療應(yīng)用研究多以神經(jīng)外科醫(yī)師的經(jīng)驗總結(jié)和臨床觀察為主，國內(nèi)外尚缺少對ACNU接觸局部正常腦組織后影響的關(guān)注。
　　 包括ACNU在內(nèi)地多種抗腫瘤藥物，由于其藥理作用不同，所出現(xiàn)的不良反應(yīng)也多種多樣，從而對不同系統(tǒng)和器官造成不同的影響、導(dǎo)致不同的表現(xiàn)?？鼓[瘤藥物的常見不良反應(yīng)有:(1)骨髓抑制:絕大多數(shù)

5、抗腫瘤藥物對造血系統(tǒng)都有不同程度的毒性作用。骨髓中各種血細(xì)胞對化療藥的敏感性決定于它們半衰期的長短，白細(xì)胞的半衰期僅6h，血小板的半衰期為5～7d;紅細(xì)胞的半衰期則長達(dá)120d，因此，表現(xiàn)對骨髓造血細(xì)胞的抑制，依次為白細(xì)胞（尤其粒細(xì)胞）、血小板，最后影響血紅蛋白，從而會出現(xiàn)周圍血象WBC、PTL及RBC的減少。(2)消化道反應(yīng):主要表現(xiàn):惡心、嘔吐、厭食、急性胃炎、腹瀉、便秘等，嚴(yán)重時出現(xiàn)胃腸道出血、腸梗阻、腸壞死，及不同程度的肝損傷。

6、這不但影響患者的情緒和進(jìn)食，甚至造成營養(yǎng)、代謝障礙和其他并發(fā)癥，進(jìn)而對個體的體重造成影響。(3)神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng):周圍神經(jīng)功能異常包括肢體麻術(shù)和感覺異常、可逆性末梢神經(jīng)炎、深腱反應(yīng)消失、下肢無力;中樞神經(jīng)功能異常包括短暫語言障礙、意識混亂、昏睡，罕見驚厥和意識喪失;植物神經(jīng)功能異常則包括小腸麻痹引起的便秘、腹脹;聽神經(jīng)功能異常包括耳鳴、耳聾、頭暈，嚴(yán)重者有高頻聽力喪失。ACNU作為抗膠質(zhì)瘤的常見有效化療藥物，在全身用藥治療應(yīng)用過程中均具有以

7、上副反應(yīng)特征（靜脈使用ACNU可使患者出現(xiàn)骨髓抑制、營養(yǎng)狀況改變、神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)異常等）。為了減少ACNU用藥的全身反應(yīng)，目前多采用ACNU局部瘤腔給藥、以輔助治療膠質(zhì)瘤并防復(fù)發(fā)，但目前為止、尚缺少局部應(yīng)用ACNU治療膠質(zhì)瘤時接觸了正常腦組織后，對神經(jīng)功能損傷、體重（間接反映個體的營養(yǎng)狀態(tài)）及血象（間接反映骨髓的造血功能）等相關(guān)功能指標(biāo)影響的研究報道，從而使ACNU科學(xué)合理的局部應(yīng)用受到一定局限。
　　 本研究以大鼠改良神經(jīng)功能損

8、傷評分(modifiedNeurologicalSeverityScore,mNSS)、體重、血象[包括白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)]為主要評估指標(biāo)，探討不同劑量ACNU接觸局部大鼠正常腦組織后、這些相關(guān)功能指標(biāo)的變化，旨在了解大鼠正常腦組織對ACNU的最大耐受劑量，為未來從事膠質(zhì)瘤模型動物的ACNU局部治療實驗提供可借鑒參考依據(jù)。
　　 方法:
　　 將45只SD大鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成A

9、、B、C、D、E五組，E組5只，余每組10只。A、B、C、D、E五組分別依次使用2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.25mg/kg、0mg/kg劑量的ACNU溶液，E組為假手術(shù)組。每只大鼠均以手術(shù)方法打開頂骨，暴露左側(cè)大腦半球，用2mm×2mm×2mm大小明膠海綿按照實驗分組、分別蘸取不同劑量的ACNU溶液，置于大鼠左側(cè)大腦半球表面;手術(shù)縫合傷口。按照分組，觀察每只大鼠術(shù)后第6小時、1天、3天、7天、10天、14天的改良神

10、經(jīng)功能損傷評分(mNSS)。每只大鼠0天即術(shù)前、術(shù)后第1天、3天、7天、10天、14天予彈簧秤稱重;每只大鼠第0天即術(shù)前、術(shù)后7天、14天采用尾尖取血法用全自動血細(xì)胞自動分析儀進(jìn)行血象檢查，記錄WBC、RBC、PLT值。
　　 結(jié)果:
　　 (1)mNSS檢測:①A組在腦組織接觸ACNU后的第1及3天，B組在腦組織接觸ACNU后的第1天均為中度損傷，其余組別及其它觀測時間均為輕度腦損傷;以2mg/kg、1mg/kg、0.

11、5mg/kg劑量ACNU溶液作用的大鼠mNSS與E組（0mg/kg劑量組）相比、均存在統(tǒng)計學(xué)差異，且E組與較低劑量的D組相比、大鼠mNSS無統(tǒng)計學(xué)差異;②各組實驗動物均出現(xiàn)“在正常腦組織接觸ACNU后mNSS逐漸升高、第1天達(dá)到高峰，且隨著時間進(jìn)展評分逐漸下降、至第10天開始評分漸趨穩(wěn)定”的現(xiàn)象;③在相同濃度下，ACNU隨著時間的延長、對大鼠腦組織有進(jìn)一步損傷，但僅在第1天出現(xiàn)mNSS高峰;④C、D、E組大鼠的mNSS于第14天分別呈1

12、.40±0.516、0.60±0.516、0.40±0.548，接近正常分值0;而A、B劑量組則在14天時間點，mNSS仍分別呈3.00±0.47、2.70±0.48。⑤A、B、C各組mNSS(5.72±1.68、4.88±1.36、3.32±1.38)與E組(2.07±1.27)的mNSS之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，D組(2.40±1.31)與E組之間的mNSS則差異不顯著(P＞0.05)。
　　 (2)體重測量:ACN

13、U用藥3天后，以2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg劑量ACNU溶液作用的大鼠體重與E組（0mg/kg劑量組）相比均存在統(tǒng)計學(xué)差異，但E組與較低劑量的D組相比、大鼠體重差異不顯著。各組實驗動物均出現(xiàn)在正常腦組織接觸ACNU后體重逐漸下降現(xiàn)象。在相同ACNU劑量下，A、B、C組在第7天達(dá)到最低體重(151.50±9.14、166.00±6.15、177.00±6.32)，D、E組在第3天體重最低（190.00±5.27及192.0

14、0±2.74）。隨著時間的推移，大鼠各組體重開始增加，A、B組在第14天超過實驗前體重，C、D、E組在第10天超過實驗前體重。A、B、C各組的體重(187.25±19.38、194.92±16.42、200.50±15.03)與E組(211.33±19.78)之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，D組(207.08±17.18)與E組之間的體重則差異不顯著(P＞0.05)。
　　 (3)血象檢測:在接觸ACNU后第7天，A、B組大鼠

15、WBC(5.84±0.37、6.34±0.13)、PLT(506.90±85.40、577.70±47.55)與E組（0mg/kg劑量組）相比存在統(tǒng)計學(xué)差異，但RBC僅在A組(8.81±0.18)與E組(9.02±0.17)之間相比、存在統(tǒng)計學(xué)差異。第14天，A組大鼠WBC、PLT(6.24±0.27、573.10±60.31)與E組(6.81±0.16，695.80±65.89)相比存在統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　

16、 1、0.25mg/kg及以下劑量的ACNU溶液可考慮作為ACNU局部接觸正常腦組織對神經(jīng)功能影響安全劑量的參考點。2、0.25mg/kg及以下劑量的ACNU溶液可考慮作為ACNU局部接觸正常腦組織營養(yǎng)狀況安全劑量的參考點。3、1mg/kg及以下劑量的ACNU溶液可考慮作為ACNU局部接觸正常腦組織對大鼠造血功能影響的安全劑量的參考點。4、雖然1mg/kg及以下劑量ACNU溶液對大鼠血象影響較小，但依據(jù)對大鼠mNSS及體重結(jié)果判斷，仍需