卡莫司汀誘導(dǎo)大鼠皮質(zhì)發(fā)育障礙模型及相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)研究.pdf

1、目的：用卡莫司汀(BCNU)誘導(dǎo)大鼠皮質(zhì)發(fā)育障礙(DCDs)動物模型，探索BCNU構(gòu)建DCDs動物模型的最佳劑量和方法，為研究DCDs及其致癇機(jī)制提供新的動物模型。 方法：1.BCNU誘導(dǎo)大鼠皮質(zhì)發(fā)育障礙模型的建立及評估：采用 BCNU不同劑量(以BCNU 5～20mg/kg梯度劑量)給妊娠17天的SD大鼠作腹腔注射，制作子代SD大鼠DCDs模型。按藥物不同注射劑量分為模型①組(BCNU 5mg/kg)、模型②組(BCNU 10

2、mg/kg)、模型③組(BCNU15mg/kg)和模型④組(BCNU 20mg/kg)，同時設(shè)立對照組。對各模型組仔鼠進(jìn)行以下觀察：①統(tǒng)計各組仔鼠的存活率；觀察各組仔鼠出生時一般狀態(tài)及出生后日常行為，包括意識狀態(tài)、生活能力、有無癲癇發(fā)作等。②分別于出生后當(dāng)天(P0)、出生后7天(P7)、P21、P56和。P84時間點測量各組仔鼠體重(反映仔鼠生長發(fā)育情況)。③采用Morris水迷宮實驗測試各組仔鼠學(xué)習(xí)和空間記憶能力。④利用紅藻氨酸誘導(dǎo)各

3、組仔鼠癲癇發(fā)作，比較其癇性發(fā)作閾值和死亡率。⑤于P21、P84兩時間點取各組仔鼠大腦組織觀察其大體形態(tài)、測腦濕重；作常規(guī)病理檢查，觀察各組仔鼠大腦皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)，以確定是否存在DCDs以及 DCDs的病理類型。通過以上各項指標(biāo)判定BCNU建立的DCDs模型是否成功及成功建模的最佳藥物劑量和方法學(xué)的可靠性。2.相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)檢測：用免疫組織化學(xué)方法檢測神經(jīng)肽Y(NPY)和鈣視網(wǎng)膜蛋白(Calretinin)陽性神經(jīng)元在最佳劑量模型組仔鼠大腦

4、中的分布，以初步探索該模型的致癇機(jī)制。 結(jié)果：1．各模型組及對照組仔鼠的存活率：對照組與模型①，②，③和④各組仔鼠的存活率分別為100％，100％，93.1％，83.3％和0％，模型④組仔鼠出生當(dāng)日全部死亡。2．仔鼠一般行為學(xué)觀察：模型①組仔鼠各觀察指標(biāo)與對照組無差別；模型②組仔鼠出生后日常行為與對照組無明顯差異；模型③組仔鼠出生時一般狀態(tài)較正常對照組差，出現(xiàn)活動量減少、反應(yīng)遲鈍、智能障礙等表現(xiàn)。各模型組沒有觀察到明顯的自發(fā)性癲

5、癇發(fā)作。3．仔鼠生長發(fā)育情況：模型①組仔鼠生長發(fā)育情況與對照組無差別(P>0.05)；模型②組出生時體重輕度降低(P<0.05)，但隨著鼠齡的增長兩組間差異消失；與對照組相比模型③組仔鼠各時間點平均體重明顯降低，隨鼠齡的增長兩組間差別越顯著(P<0.05)。4．水迷宮實驗：模型①組仔鼠水中逃避潛伏期及跨過原平臺次數(shù)和對照組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；模型②組仔鼠第1、2天水中逃避潛伏期比對照組仔鼠延長(P<0.05)，第3、4天無統(tǒng)計

6、學(xué)差別，跨過原平臺次數(shù)與對照組無差異(P>0.05)；訓(xùn)練期間模型③組仔鼠水中逃避潛伏期始終較對照組延長，第5天撤除平臺后，跨過原平臺所在位置的次數(shù)明顯少于對照組(P<0.05)。5．紅藻氨酸誘發(fā)癲癇發(fā)作實驗：模型①組仔鼠癲癇發(fā)作的潛伏期和持續(xù)時間及死亡率與對照組無差別(P>0.05)；模型②組仔鼠癲癇發(fā)作的潛伏期縮短(P<0.05)，但癲癇發(fā)作持續(xù)時間及死亡率與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；模型③組仔鼠癇性發(fā)作的潛伏期縮短，癲癇

7、持續(xù)狀態(tài)時間較對照組延長，且死亡率明顯高于對照組(P<0.05)。6．大腦組織形態(tài)、腦濕重及病理學(xué)檢查比較：模型①組仔鼠大腦組織形態(tài)和腦濕重與對照組相比無差異，無DCDs病理改變；模型②組仔鼠大腦外形及腦濕重與對照組無明顯差別(P>0.05)，DCDs 發(fā)生率為41.67％；模型③組仔鼠與對照組相比腦組織重量減輕、形態(tài)異常，隨著鼠齡的增長差別越明顯，DCDs發(fā)生率為100％。典型病理改變包括大腦皮質(zhì)厚度變薄、層狀結(jié)構(gòu)紊亂、神經(jīng)細(xì)胞缺失發(fā)

8、育不良，皮質(zhì)及海馬神經(jīng)元異位等，類似人類皮質(zhì)發(fā)育不良和神經(jīng)元結(jié)節(jié)狀異位。7．神經(jīng)遞質(zhì)檢測：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示模型③組仔鼠大腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)肽Y神經(jīng)元明顯減少(P<0.05)；鈣視網(wǎng)膜蛋白神經(jīng)元在模型③組仔鼠大腦皮質(zhì)和海馬異常表達(dá)，且神經(jīng)元發(fā)育不良。 結(jié)論：1．本實驗給予孕17d SD大鼠腹腔注射BCNU 15mg/kg可以制作出理想的仔鼠DCDs模型，而腹腔注射BCNU5mg/kg、10mg/kg不能成功建立DCDs模型，20

9、mg/kg的劑量過大。2．本模型仔鼠生長發(fā)育差、行為學(xué)異常、學(xué)習(xí)記憶障礙、癲癇發(fā)作閾值低，又具有典型的DCDs病理改變，很好地體現(xiàn)了人類DCDs的行為學(xué)和病理學(xué)特征。3．本模型仔鼠大腦中神經(jīng)肽 Y 和鈣視網(wǎng)膜蛋白神經(jīng)元的異常為DCDs易致癇性發(fā)作的機(jī)制提供了理論依據(jù)。4．本模型仔鼠DCDs能模擬人類大腦皮質(zhì)發(fā)育不良及神經(jīng)元異位，與國外孕15d腹腔注射BCNU 20mg/kg模型相比仔鼠存活率更高，模型的重復(fù)性更好，且操作簡單，是一種新的