大鼠脛神經(jīng)損傷后遠側(cè)端髓鞘和軸索再生及他克莫司納米微球局部緩釋用藥研究.pdf

1、Ⅰ.大鼠脛神經(jīng)損傷后遠側(cè)端髓鞘和軸索再生的研究
　　立題背景:英國生理學(xué)家Waller(A.V.Waller1816-1870)早在1850年就發(fā)現(xiàn)周圍神經(jīng)切斷后,其神經(jīng)遠端會由近及遠直至神經(jīng)末端出現(xiàn)順行性潰變，遠端神經(jīng)發(fā)生潰變以后，近端神經(jīng)再由近及遠向潰變遠端神經(jīng)內(nèi)生長，并逐漸取代原來的神經(jīng)組織，即神經(jīng)再生。神經(jīng)切斷以后遠段神經(jīng)會發(fā)生變性，是沃勒首先報道的，故稱沃勒潰變或沃勒變性（Wallerian Degeneration）[

2、1,2]。
　　已知中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元在分化成熟后不具備分裂增殖能力，而周圍神經(jīng)損傷后，可由靜態(tài)相進入增殖相，具備再生能力。1984年哥德堡博士（Goldberg MD）[3]用肌電圖檢查周圍神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生質(zhì)量時發(fā)現(xiàn)，肌電圖檢查結(jié)果與神經(jīng)功能恢復(fù)結(jié)果不一致，即電生理評價結(jié)果與臨床神經(jīng)功能恢復(fù)存在較大差異,盡管電生理結(jié)果顯示神經(jīng)生長恢復(fù)到正常值的80％，但神經(jīng)功能恢復(fù)僅為40-60%。動物實驗表明，將大鼠坐骨神經(jīng)切斷再原位縫合，

3、結(jié)合使用營養(yǎng)神經(jīng)的藥物后，盡管肉眼可見縫合口處神經(jīng)生長平整，仍出現(xiàn)足底皮膚潰瘍、肌萎縮及肌力減弱或肌無力，而肌電圖檢測的運動傳導(dǎo)速度指標卻顯示良好。神經(jīng)修復(fù)研究亦表明，神經(jīng)再生的電生理評價結(jié)果與臨床神經(jīng)功能恢復(fù)存在較大差異。為了反映神經(jīng)功能恢復(fù)狀態(tài)，并從不同角度對神經(jīng)再生作出觀察評價，我們采用神經(jīng)原位橋接術(shù)式修復(fù)損傷神經(jīng)方法作為動物模型，從組織學(xué)、生理學(xué)角度把神經(jīng)纖維分成髓鞘和軸索兩部分進行對比檢測，并在縫合口遠側(cè)神經(jīng)干上設(shè)置多個檢測點

4、，采用神經(jīng)電生理和組織形態(tài)學(xué)染色等方法來判斷神經(jīng)再生。
　　目的：1.應(yīng)用電生理、神經(jīng)示蹤和髓鞘組織化學(xué)方法，探討大鼠脛神經(jīng)損傷時髓鞘和軸突再生速度是否一致；2.探討在神經(jīng)再生的研究中，電生理與臨床功能恢復(fù)存在差異以及電生理指標不能恢復(fù)到正常狀態(tài)的原因。
　　方法：1.選用Wistar大鼠54只，神經(jīng)原位橋接動物模型，按手術(shù)先后分為患側(cè)的實驗組和健側(cè)的正常對照組；2.實驗組根據(jù)縫合口遠段熒光示蹤劑注射點和取材點的部位不同，設(shè)

5、為10mm距離組和30mm距離組，每組6只。分別在術(shù)后4周、8周、12周進行熒光劑示蹤、髓鞘形態(tài)、電生理、高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)檢測。
　　結(jié)果：1.于實驗8周及12周L3-L6脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)有熒光標記細胞，30mm距離組明顯少于10mm距離組，P<0.01,差異有顯著性；2.在患側(cè)8周、12周其損傷神經(jīng)遠側(cè)已有大量排列有序的有髓神經(jīng)纖維10mm距離組與30mm距離組之間，P>0.05；3.其運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度，實驗組4周與8周、

6、12周之間相比，P<0.01，有顯著性差異；8周與12周之間相比，P>0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.電生理結(jié)果與神經(jīng)纖維中的髓鞘數(shù)量密切相關(guān)；2.髓鞘和軸索生長速度出現(xiàn)不一致。提示電生理能反映髓鞘電傳導(dǎo)通道的建立，但不能直接判斷軸索的化學(xué)傳導(dǎo)通道建立和神經(jīng)的支配特性。
　?、?他克莫司納米微球局部緩釋用藥對神經(jīng)損傷后遠端髓鞘和軸索再生影響的應(yīng)用研究
　　目的：觀察大鼠脛神經(jīng)損傷后局部短暫應(yīng)用他克莫司（FK

7、506）納米微球緩釋顆粒對神經(jīng)再生的影響。
　　方法：建立左側(cè)脛神經(jīng)切斷的端端縫合模型，將 Wistar大鼠36只，隨機分為用藥的實驗組和損傷對照組。實驗組根據(jù)兩個緩慢釋放用藥時間不同分為實驗10d組和實驗15d組，每組6只，于術(shù)后2周、3周分別取縫合口遠側(cè)端神經(jīng)干做變性軸索、變性髓鞘染色，結(jié)合神經(jīng)髓鞘染色、HE染色，觀察其變性軸索、變性髓鞘、再生髓鞘纖維數(shù)和觀察影響局部用藥的降解因素。
　　結(jié)果：2周及3周時縫合口遠側(cè)端神