高血壓病肝陽上亢證與高血壓腦出血肝陽化風證的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:通過高血壓腦出血肝陽化風證、高血壓病肝陽上亢證及健康人對照組外周血單個核細胞的雙向凝膠電泳圖譜的建立，鑒定并分析差異表達的蛋白質(zhì)，并在蛋白質(zhì)表達圖譜研究的基礎(chǔ)上，比較不同證中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶omega 1(GSTO1)量的表達，以探討同病異證相關(guān)證高血壓病肝陽上亢證與高血壓腦出血肝陽化風證證本質(zhì)內(nèi)涵。 方法:用淋巴細胞分離液分離出高血壓腦出血肝陽化風證組、高血壓病肝陽上亢證組及健康人對照組外周血單個核細胞，采用二維凝膠電

2、泳分離三組總蛋白質(zhì)，獲得差異表達蛋白質(zhì)，制備蛋白質(zhì)組表達圖譜,PDQuest軟件分析，并通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF)和數(shù)據(jù)庫對差異表達的蛋白質(zhì)分析鑒定。采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測正常組，肝陽上亢證組，肝陽化風證組GSTO1基因表達水平。 結(jié)果： 1.各組PBMCs總蛋白2-DE圖譜的建立及相同和差異蛋白質(zhì)的識別：建立了高血壓病肝陽上亢證，高血壓腦出血肝陽化風證及健康對照

3、外周血單個核細胞蛋白質(zhì)表達圖譜；高血壓腦出血肝陽化風證與高血壓病肝陽上亢證比較有6個相同表達的蛋白質(zhì)，鑒定出6個共6種蛋白質(zhì)。18個差異表達蛋白質(zhì)，鑒定出16個共16種蛋白質(zhì)。鑒定出的蛋白質(zhì)根據(jù)其功能涉及細胞骨架蛋白、代謝酶類、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、抗氧化蛋白、血液蛋白等。 2.差異蛋白驗證結(jié)果：RT-PCR法證實GSTO1在三組的表達水平與2-DE結(jié)果一致：與正常組相比，肝陽上亢證與肝陽化風證差異蛋白GSTO1表達量均明顯增加(p<0.0

4、5)，肝陽上亢證組與肝陽化風證組比較，后者GSTO1表達量又明顯高于肝陽上亢證組(p<0.05)。 結(jié)論 1.初步建立了高血壓病肝陽上亢證，高血壓腦出血肝陽化風證及健康對照外周血單個核細胞蛋白質(zhì)表達圖譜。 2.高血壓病肝陽上亢證與高血壓腦出血肝陽化風證具有相同及差異表達的蛋白質(zhì)，提示同病相關(guān)證有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)，但同病異證雖屬同一病，不同階段(不同證型)也有不同的本質(zhì)內(nèi)涵。 3.GSTO1的RT-PCR驗證