腦梗死肝陽化風(fēng)證患者外周血單個核細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究目的： 1.建立腦梗死肝陽化風(fēng)證、陰虛風(fēng)動證高分辨率的二維凝膠電泳圖譜； 2.應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析并鑒定腦梗死肝陽化風(fēng)證和陰虛風(fēng)動證的相關(guān)蛋白質(zhì)； 3.從腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)在腦梗死肝陽化風(fēng)證及陰虛風(fēng)動證中的基因表達(dá)，探討中醫(yī)肝陽化風(fēng)證與陰虛風(fēng)動證的關(guān)聯(lián)性與差異性。 研究方法：設(shè)腦梗死肝陽化風(fēng)證組、健康人對照組、腦梗死陰虛風(fēng)動證對照組3組，嚴(yán)格按照疾病診斷、證

2、侯診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇腦梗死肝陽化風(fēng)證患者15例，腦梗死陰虛風(fēng)動證患者15例，按照納入排除標(biāo)準(zhǔn)，選擇健康人15例，取外周靜脈血分離單個核細(xì)胞提取蛋白質(zhì)，經(jīng)雙向凝膠電泳，考馬斯亮藍(lán)染色獲取凝膠圖譜，PDQuest V7.3.1軟件比較分析3組圖譜并識別腦梗死肝陽化風(fēng)證與陰虛風(fēng)動證的差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)及相同表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)。MALDI-TOF-MS質(zhì)譜儀進(jìn)行肽質(zhì)量指紋譜的鑒定，Mascot檢索軟件檢索軟件在Swiss-prot數(shù)據(jù)庫搜索進(jìn)行蛋白鑒定，檢

3、索出相關(guān)蛋白質(zhì)的名稱、分類及功能。并用RT-PCR技術(shù)檢測腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)在腦梗死肝陽化風(fēng)證及陰虛風(fēng)動證中的基因表達(dá)情況。 研究結(jié)果： 1.初步建立了腦梗死肝陽化風(fēng)證、健康人組、腦梗死陰虛風(fēng)動證患者外周血單個核細(xì)胞2-DE圖譜，分別獲得蛋白質(zhì)點(diǎn)459個，552個，644個； 2.PDQuest V7.3.1軟件比較分析，發(fā)現(xiàn)了腦梗死肝陽化風(fēng)證與陰虛風(fēng)動證的相同蛋白質(zhì)點(diǎn)8個，

4、差異蛋白質(zhì)點(diǎn)23個； 3.MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析和MASCOT軟件檢索Swissprot蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫鑒定出27個蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，共20種蛋白質(zhì)，各種蛋白質(zhì)點(diǎn)在3組的表達(dá)各異，經(jīng)肝陽化風(fēng)組與健康對照組，陰虛風(fēng)動組與健康對照組，以及肝陽化風(fēng)組與陰虛風(fēng)動組的相互比較，發(fā)現(xiàn)肝陽化風(fēng)組與陰虛風(fēng)動組差異蛋白質(zhì)點(diǎn)23個，鑒定出22個共15種蛋白質(zhì)，分別為成帽蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白-1、腺苷酰環(huán)化酶聯(lián)合蛋白-1、鳥苷二磷酸解離抑制因子

5、2、γ-肌動蛋白、鈣結(jié)合蛋白、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈、抗增殖蛋白、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶ω-1、硫氧還蛋白過氧(化)物酶-1、Visual cortex cDNA、假想蛋白、Ras抑制蛋白、受體相關(guān)蛋白/RNA聚合酶相關(guān)蛋白、鋅結(jié)合蛋白；相同表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)8個，鑒定出6個蛋白質(zhì)點(diǎn)共5種蛋白質(zhì).分別為核內(nèi)不均一核糖核蛋白、絲氨酸/蘇氨酸特異蛋白激酶、踝蛋白、纖維蛋白素原β-鏈前體、纖維蛋白素原α鏈前體，包括細(xì)胞骨架蛋白，信號傳導(dǎo)蛋白，氧化還原蛋白，凋亡相

6、關(guān)蛋白，血液蛋白等多類蛋白質(zhì)表達(dá)異常； 4.腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)mRNA在腦梗死肝陽化風(fēng)組中表達(dá)缺失，陰虛風(fēng)動組中表達(dá)明顯下調(diào)，且表達(dá)量有顯著差異性(P<0.05)。 研究結(jié)論： 1.初步建立了腦梗死肝陽化風(fēng)證、腦梗死陰虛風(fēng)動證及健康人PBMC2-DE圖譜，并通過MODI-TOP-MS技術(shù)鑒定分析出腦梗死肝陽化風(fēng)證與陰虛風(fēng)動證相同表達(dá)蛋白與差異表達(dá)蛋白，提示本病相類證有共同的物