大豆分離蛋白酶水解及肽的應(yīng)用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以大豆分離蛋白為原料，用Alcalase蛋白酶和Protamex蛋白酶進(jìn)行水解，通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了條件；利用凝膠過濾法對(duì)大豆多肽進(jìn)行分離；利用Rancimat對(duì)多肽的抗氧化活性進(jìn)行了分析；利用高效凝膠色譜法分析了多肽的分子量分布；研究大豆肽飲料。 Alcalase堿性蛋白酶的最佳條件為，90℃水浴加熱預(yù)處理10min，大豆分離蛋白濃度5.9％，加酶量2.2％，溫度61℃，酶解時(shí)間4h，pH 8.0，在此條件下

2、，可以得到水解度為16.2％的酶解液。Protamex蛋白酶的最佳條件為，90℃水浴加熱預(yù)處理10min，大豆分離蛋白濃度6.0％，加酶量2.4％，酶解溫度51℃，酶解時(shí)間4h，pH7.0，在此條件下，可以得到水解度為12.94％的酶解液。然后將酶解液在沸水浴加熱15min鈍化蛋白酶，降至室溫后用HCI溶液調(diào)節(jié)pH值到4.5，4000r/min離心15min，收集上清液，噴霧干燥，對(duì)Alcalase蛋白酶水解液進(jìn)行活性炭脫色脫苦，脫色脫

3、苦條件為：炭液比0.69/0(W/V)，溫度50±2℃，慢速攪拌2h。 對(duì)Protamex蛋白酶水解制得大豆多肽進(jìn)行超濾膜過濾后，得到的分子量在6000Da以下的多肽進(jìn)行Sephadex LH-20凝膠色譜分離。得到B1、B2和B3三個(gè)組分，含量分別約為20.12％，45.89％和33.98％。然后對(duì)B2組分再次進(jìn)行分離，得到a、b、c和d四個(gè)組分，含量分別約為3.73％，21.76％，61.22％和13.29％。 分子

4、量6000Da到10000Da的樣品A的抗氧化性低于分子量6000Da以下的樣品B。經(jīng)過葡聚糖凝膠過濾后得到的B1、B2和B3樣品中，B2的抗氧化性最好，B3次之。對(duì)B2再次進(jìn)行凝膠分離得到的a、b、c和d四個(gè)組分的抗氧化性依次為a>b>d>c。 Protamex蛋白酶水解多肽得到的多肽分子量主要集中在5500～2000Da之間；Alcalase堿性蛋白酶水解分子量主要集中在1200～400Da之間；日本不二大豆多肽分子量主要集