大豆蛋白ACE抑制肽的酶法制備及分離純化.pdf

1、由蛋白酶在溫和條件下水解大豆蛋白而獲得的大豆短肽可通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的活性而使血壓降低，其食用安全性高，對(duì)高血壓患者可以起到降壓作用. 本文首先利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和堿性蛋白酶水解大豆分離蛋白，進(jìn)行大豆分離蛋白的酶解試驗(yàn)，預(yù)處理溫度、反應(yīng)時(shí)間、加酶量等因素均對(duì)酶解液水解度產(chǎn)生影響.五種蛋白酶單一及復(fù)合酶的大豆蛋白酶解產(chǎn)物對(duì)ACE活性有大小程度不同的抑制作用，對(duì)上清液進(jìn)行ACE抑制活性測(cè)定

2、，其中以堿性蛋白酶水解物的ACE抑制活性最高達(dá)到45﹪，胃蛋白酶次之，為40﹪. 采用截留分子量10K Da、3K Da.、1K Da的超濾膜對(duì)大豆蛋白多酶水解液進(jìn)行分級(jí)分離.不同蛋白酶解物配置相同濃度，樣品分子量范圍在1K Da以下的多肽混合物的含量分別為堿性蛋白酶和胃蛋白酶總水解物的71.25﹪和69.35﹪.不同分子量范圍的水解物均對(duì)ACE活性有抑制作用，其.ACE活性抑制程度隨分子量的減小而增大.分子量范圍在1K Da以

3、下組分對(duì)ACE的抑制效果最高，其抑制率分別為64.57﹪和78.49﹪.胃蛋白酶水解物的<1K Da.部分的ACE抑制率高于堿性蛋白酶，而中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解物<1KDa部分的ACE抑制率大致相當(dāng)，且均小于胃蛋白酶和堿性蛋白酶.Tricine-SDS-PAGE電泳圖譜表明，超濾分級(jí)效果明顯，三分級(jí)組分在分子量上明顯小于未水解的大豆蛋白，且三者的分子量分布呈現(xiàn)遞減趨勢(shì). 對(duì)胃蛋白酶酶解大豆分離蛋白進(jìn)行了正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

4、，制備胃蛋白酶水解大豆蛋白ACE抑制肽的最佳水解條件為:底物濃度3﹪，加酶量2﹪，水解時(shí)間2小時(shí)，得到的最大水解度17.1﹪.PL1000在酸性條件下溶解性明顯高于堿性條件下；溶解性隨溫度升高而逐漸提高. 經(jīng)過(guò)凝膠色譜層析Superdex Peptide 10/300 GL、反相色譜層析Sephasilpeptide 5μm C18 ST46/250連續(xù)色譜分離技術(shù)，從大豆蛋白的胃蛋白酶水解物小于1K Da組分中分離出了ACE活