大豆肽的分離純化及應(yīng)用研究.pdf

1、大豆肽具有許多獨(dú)特的理化特性與生物學(xué)活性，同時(shí)具有原料來(lái)源廣泛、價(jià)廉，安全性好，無(wú)毒副作用，便于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。本文以兩種樣品肽作為研究對(duì)象，分別對(duì)其理化性質(zhì)，分離純化方法以及具體的應(yīng)用進(jìn)行研究，為大豆肽產(chǎn)品的繼續(xù)深入研究提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　分析測(cè)定兩種樣品肽的一般成分及理化性質(zhì)，結(jié)果表明:大豆分離蛋白肽和豆粕肽的氨基酸組成基本一致，但蛋白肽含量相差較大;在較廣泛的pH值條件下，前者保持更好的溶解狀態(tài)。隨著濃度的增大，兩種樣品

2、肽的粘度均有增加，但濃度超過(guò)60％后，大豆分離蛋白肽保持良好的流動(dòng)性，而豆粕肽的流動(dòng)性降低;大豆分離蛋白肽具有更強(qiáng)的還原能力和抗氧化能力，但乳化性及其穩(wěn)定性卻不如豆粕肽。
　　大豆分離蛋白肽經(jīng)凝膠過(guò)濾層析洗脫分離，選用Sephadex G-25為填料，最佳洗脫條件為:徑高比1∶35;上樣體積3mL;上樣濃度0.01g/mL;洗脫流速16mL/h;洗脫液為蒸餾水。高效凝膠滲透色譜(HPGPC)分析結(jié)果表明，各洗脫組分均為單一組成，分

3、子量分別為:組分1:1860Da;組分2:1426Da;組分3:853Da;組分4:376Da。紅外色譜分析表明:四個(gè)組分的峰形基本一致，在3049～3406cm-1處和1690～1630cm-1之間具有典型的酰胺吸收峰。
　　選用DA021-CⅡ型大孔吸附樹(shù)脂作為填料洗脫分離豆粕肽，徑高比1∶30，樣品肽液pH值3.0，濃度45mg/mL，上樣量為40mL，吸附流速為0.5mL/min，解析流速為1.0mL/min，水解析體積為

4、2BV，經(jīng)梯度乙醇洗脫可以得到4個(gè)組分;繼續(xù)用Sephadex G-25柱層析洗脫得6個(gè)組分，HPGPC測(cè)定其分子量分別為:aⅠ:1845Da、209Da;bⅠ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;cⅠ:2314Da、197Da;dⅠ:1318Da、180Da; dⅡ:2719Da、209Da。
　　采用響應(yīng)面法(RSM)對(duì)大豆肽與鈣的螯合工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，最佳工藝參數(shù)為:大豆肽與氯化鈣的混合比4.2∶1(w/w)，水浴時(shí)

5、間21.3min，無(wú)水乙醇添加6倍，大豆肽-鈣的得率可達(dá)65.48％，鈣含量為7.74g/（100g大豆肽-鈣產(chǎn)品）。紅外色譜分析表明:在大豆肽與鈣的螯合試驗(yàn)中，氨基與羧基均參與了螯合反應(yīng)。
　　試驗(yàn)采用活菌計(jì)數(shù)法和光密度法分析兩種樣品肽對(duì)S.thermophilus生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明:兩種樣品肽均促進(jìn)了S.thermophilus的生長(zhǎng)，但隨著在培養(yǎng)基中添加量的增加，豆粕肽對(duì)S.thermophilus的促生長(zhǎng)作用逐漸減弱，而