柔嫩艾美耳球蟲組蛋白去乙?；窼ir2克隆表達(dá)及表達(dá)動(dòng)態(tài)分析.pdf

1、目前，抗球蟲藥物仍然是控制雞球蟲病的主要手段，但因其長期廣泛的使用，雞球蟲對幾乎所有已商業(yè)化使用的抗球蟲藥物都產(chǎn)生了抗藥性。盡管雞球蟲病減毒活卵囊疫苗已在一定范圍推廣應(yīng)用，但其帶蟲免疫、仍然具有一定的致病能力且具有潛在環(huán)境散毒和侵蝕的特點(diǎn)，決定其不可能完全取代藥物在球蟲病防治上的應(yīng)用。集約化養(yǎng)雞業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展和球蟲病持續(xù)控制亟需新型抗球蟲藥物和疫苗的問世。Sir2作為一種NAD+依賴的組蛋白去乙?；?，在染色質(zhì)重塑、衰老、調(diào)節(jié)細(xì)胞代

2、謝生命活動(dòng)中具有重要作用，醫(yī)學(xué)和模式生物的大量研究結(jié)果揭示其是具有重大潛在價(jià)值的藥物靶標(biāo)。瘧原蟲、弓形蟲等頂復(fù)門原蟲中一般具有兩種Sir2蛋白，SIR2A和SIR2B，且基因組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)組蛋白修飾和染色質(zhì)占位等表觀遺傳機(jī)理可能是它們發(fā)育過程中基因表達(dá)調(diào)控的主要方式。艾美耳球蟲全基因組數(shù)據(jù)分析表明，球蟲與弓形蟲、瘧原蟲等相似，也具有2種Sir2組蛋白去乙?；?，但目前關(guān)于球蟲Sir2的研究尚鮮見報(bào)道。為探討Sir2對球蟲發(fā)育和寄生生活過

3、程中對基因表達(dá)的調(diào)控作用及其作為藥物靶標(biāo)候選分子的意義，先期進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）Sir2（EtSir2）的基因克隆、表達(dá)及其在不同發(fā)育階段表達(dá)動(dòng)態(tài)的研究，以為深入研究其藥靶活性、基因表達(dá)調(diào)控活性及其機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。獲得主要結(jié)果如下:
　　1.PCR克隆得到了EtSir2A的全長ORF序列及EtSir2B部分編碼序列，并通過生物信息學(xué)軟件對EtSir2A序列進(jìn)行了初步分析。EtSir2A ORF全

4、長909bp，編碼302氨基酸，其理論等電點(diǎn)為6.04，分子量大小約為43.4kDa，無信號(hào)肽序列，表明其是胞內(nèi)定位和發(fā)揮生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。構(gòu)建了pMAL-c2x-EtSir2A原核表達(dá)載體，并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌Transetta(DE3)中，經(jīng)由終濃度為1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)后，成功獲得了EtSir2A-MBP融合蛋白的可溶性表達(dá)。
　　2.采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測并以相對定量法計(jì)算EtSir2A mRNA在E.ten