LIN-10與HIF-1介導(dǎo)的缺氧神經(jīng)損傷的相關(guān)性初步研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)細(xì)胞遺傳學(xué)的方法,觀(guān)察VAMP,LIN-10,RAB-3,SNG-1在缺氧條件下的表達(dá)變化,從而明確缺氧引起神經(jīng)損傷的作用部位并篩選出缺氧相關(guān)因子;觀(guān)察篩取出的缺氧相關(guān)因子LIN-10與經(jīng)典缺氧因子HIF-1之間是否存在相關(guān)性,為后續(xù)深入研究缺氧導(dǎo)致神經(jīng)損傷的具體分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　設(shè)計(jì)時(shí)間及地點(diǎn)細(xì)胞生物學(xué)試驗(yàn),于2011年9月—2012年2月于美國(guó)斯坦福大學(xué)生命科學(xué)系ShenLab完成。
　　材料：本實(shí)驗(yàn)

2、中所有涉及的突變實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,實(shí)驗(yàn)試劑,實(shí)驗(yàn)儀器等均來(lái)自美國(guó)斯坦福大學(xué)ShenLab。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)可基本分為兩個(gè)部分,第一部分為缺氧相關(guān)因子的篩選,即將含有候選因子的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物分別置于低氧及常氧環(huán)境下培育后,在共聚焦顯微鏡下觀(guān)察其在神經(jīng)元的表達(dá)情況,從而篩選出目的因子。第二部分為已篩選出的目的因子LIN-10與HIF-1的相關(guān)性研究,將已篩選出的缺氧相關(guān)因子LIN-10通過(guò)顯微注射的方法轉(zhuǎn)基因至含有hif-1突變的相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物體內(nèi),在共聚焦熒光顯微鏡下觀(guān)察其在神經(jīng)元的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：在缺氧相關(guān)基因篩選實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組缺氧條件下培養(yǎng)的kyIs235(-)在尾部?jī)蓚?cè)神經(jīng)元內(nèi)的LIN-10熒光標(biāo)記基本消失,而與其相應(yīng)的對(duì)照組常氧條件下kyIs235(+)在相同部位熒光標(biāo)記亮度顯著;其余候選因子的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組內(nèi)未見(jiàn)明顯差異。在LIN-10與HIF-1的相關(guān)性研究中,在含有hif-1突變基因的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物神經(jīng)元中未見(jiàn)明顯LIN-10熒光標(biāo)記,而在不含有hi