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文檔簡(jiǎn)介
1、肺炎克雷伯菌(KPn)是社區(qū)獲得性感染和醫(yī)院感染中最常見的病原菌之一。及早使用有效抗生素是治愈的關(guān)鍵。然而,隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用,KPn對(duì)喹諾酮的耐藥性包括對(duì)環(huán)丙沙星(CIP)的耐藥率逐年上升。在臨床上,黃連素(Ber)主要用來(lái)治療感染性腹瀉等相關(guān)疾病,但單用黃連素或協(xié)同抗生素對(duì)抗其他細(xì)菌感染尤其是肺炎克雷伯菌的的報(bào)道很少,故本研究探討黃連素與環(huán)丙沙星聯(lián)用是否能增加抗菌作用,根據(jù)研究結(jié)果制定針對(duì)性抗感染治療合理用藥方案,指導(dǎo)臨床用藥。
2、
目的:
1.建立穩(wěn)定傳代的高度耐藥的KPn模型,了解環(huán)丙沙星在體外對(duì)KPn的耐藥誘導(dǎo)作用;
2.研究黃連素與環(huán)丙沙星聯(lián)用能否增加環(huán)丙沙星對(duì)KPn的抗菌作用;
3.探討兩藥聯(lián)用對(duì)敏感菌和耐藥菌的效果差異;
4.檢測(cè)不同濃度的黃連素與兩藥聯(lián)合抗菌效果的關(guān)系。
方法:
1.從臨床收集的KPn菌株中按要求篩選出敏感株17株和臨床耐藥株9株。
2.用環(huán)丙沙星逐濃度梯
3、度體外人工誘導(dǎo)出高度耐藥的KPn菌株,并采用耐藥穩(wěn)定性傳代試驗(yàn)篩選出穩(wěn)定的高度耐藥菌株。并參照2011年CLSI紙片法標(biāo)準(zhǔn),采用K-B紙片擴(kuò)散法對(duì)體外人工誘導(dǎo)出的高度耐藥菌株進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。
3.實(shí)驗(yàn)分組:KPn分為敏感株組(17株)、臨床耐藥株組(9株)和誘導(dǎo)耐藥株組(14株)。
4.采用瓊脂二倍稀釋法,測(cè)定加入黃連素前后KPn菌株對(duì)環(huán)丙沙星的最低抑菌濃度(MIC)變化情況,并分別計(jì)算出3組菌株對(duì)環(huán)丙沙星的MIC下降
4、率。
5.分別設(shè)置空白對(duì)照、單用環(huán)丙沙星、單用100μg/ml黃連素、500μg/ml黃連素、100μg/ml黃連素+環(huán)丙沙星、500μg/ml黃連素+環(huán)丙沙星6組,選取上一步方法中兩藥聯(lián)用下有效的陽(yáng)性株12株(敏感株6,臨床耐藥株2株,誘導(dǎo)耐藥株4株),用分光光度計(jì)分別測(cè)定0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10h細(xì)菌的OD600值。以培養(yǎng)時(shí)間為X軸,OD600值為Y軸,取平均值繪制出不同菌株的生長(zhǎng)曲線。
結(jié)果
5、:
1.17株KPn敏感株在含128μg/ml環(huán)丙沙星平板上無(wú)一存活。有3株KPn菌株在誘導(dǎo)過(guò)程中死亡。其余14株KPn菌株均誘導(dǎo)成功,對(duì)環(huán)丙沙星的MIC均超過(guò)128μg/ml,同時(shí)對(duì)莫西沙星(MXF)的耐藥率為100%。
2.與單用環(huán)丙沙星比較,加入黃連素后,敏感菌組對(duì)環(huán)丙沙星的MIC下降率為35.3%(6/17);臨床耐藥株組為22.2%(2/9);誘導(dǎo)耐藥株組為28.6%(4/14)。3組菌株之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)
6、學(xué)意義(P>0.05)。
3.藥物對(duì)細(xì)菌開始生長(zhǎng)的遲緩期并無(wú)明顯的影響,主要是從對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期開始作用,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),生長(zhǎng)曲線壓低越明顯,到了平臺(tái)期曲線逐漸趨向平穩(wěn)。作用相同時(shí)間下,與空白對(duì)照組相比,單用100μg/ml黃連素與500μg/ml黃連素均無(wú)明顯差異;單用環(huán)丙沙星的抑菌效果比單用100μg/ml黃連素或500μg/ml黃連素好;環(huán)丙沙星聯(lián)合100μg/ml黃連素或500μg/ml黃連素后均比單用環(huán)丙沙星的抑菌效果好,
7、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);500μg/ml黃連素聯(lián)合環(huán)丙沙星的抑菌效果較100μg/ml黃連素更加明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而敏感菌、臨床耐藥菌和誘導(dǎo)耐藥菌的生長(zhǎng)曲線并無(wú)明顯差異。
隨機(jī)挑選敏感菌S10的生長(zhǎng)曲線為例,經(jīng)計(jì)算得出:100μg/ml黃連素使環(huán)丙沙星的抗菌作用增加了0.3倍,500μg/ml黃連素使環(huán)丙沙星的抗菌作用增加了3.4倍,高濃度黃連素的聯(lián)合抗菌作用是低濃度的3.4倍。
從
8、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示500μg/ml黃連素的體外聯(lián)合抗菌效果最佳,因此,我們?cè)O(shè)想500μg/ml黃連素是人體內(nèi)最佳的血藥濃度,經(jīng)計(jì)算劑量為0.43g。此劑量在人體使用的安全范圍內(nèi),因此適用于臨床。
結(jié)論:
1.環(huán)丙沙星長(zhǎng)期低濃度選擇壓力易引起細(xì)菌耐藥,而且還引起喹諾酮類抗菌藥物如莫西沙星之間的交叉耐藥。
2.黃連素與環(huán)丙沙星聯(lián)用不但能增加環(huán)丙沙星對(duì)肺炎克雷菌敏感株的抗菌作用,還可以逆轉(zhuǎn)耐藥株對(duì)環(huán)丙沙星的敏感性而達(dá)到
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