環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對多藥耐藥肺炎克雷伯菌生物膜的影響.pdf

1、目的：
　　探討環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對多藥耐藥的肺炎克雷伯菌（ Klebsiella pneumoniae, KPn）生物膜形成的影響。
　　方法：
　　1.臨床收集ESBLs（+）的多藥耐藥的KPn和對含環(huán)丙沙星在內(nèi)的、3種或者3種以上不同類的抗菌藥物敏感的KPn。測定各KPn株的最低抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC），測定多藥耐藥KPn生物膜的最低抑菌濃度（Th

2、e minimal inhibitory concentrations of the biofilm,MIC-b）。
　　2.應(yīng)用結(jié)晶紫法測定多藥耐藥KPn的產(chǎn)膜能力和環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對KPn生物膜形成的影響。
　　3.利用超聲震蕩平板稀釋菌落計數(shù)法測定多藥耐藥KPn生物膜表面活菌菌落數(shù)和共聚焦顯微鏡（Confocal LaserScanning Microscopy,CLSM）測定平均熒光強度分析證實結(jié)晶紫法的實驗

3、結(jié)果，觀察環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對KPn生物膜形成的影響。
　　結(jié)果：
　　1.臨床收集的7株多藥耐藥的KPn（R1-R7）和12株對抗生素敏感的KPn株（S1-S12）均對512μg/ml黃連素仍不敏感。單用環(huán)丙沙星R1-7的MIC為1~128μg/ml，S1-12的MIC為0.0019~0.03125μg/ml，環(huán)丙沙星和黃連素（256或512μg/ml）聯(lián)用后，可使66.67％(8/12)對抗生素敏感的KPn株對環(huán)丙

4、沙星的MIC下降1倍，100%（7/7）的多藥耐藥的KPn對環(huán)丙沙星的MIC下降1倍，但多藥耐藥株或抗生素敏感的KPn兩者的下降率無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.7株ESBL（+）的多藥耐藥KPn中，強產(chǎn)膜株2株(28.57%)，中度產(chǎn)膜株4株(57.14%)，弱產(chǎn)膜株1株（14.29%），12株ESBL（-）的抗生素敏感的KPn中，強產(chǎn)膜株2株（16.67%），中度產(chǎn)膜株3株（25%），弱產(chǎn)膜株2株（16.67%），不產(chǎn)

5、膜株5株（41.67%）。臨床耐藥菌株和敏感菌株之間，產(chǎn)膜株和不產(chǎn)膜株的比例上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（100% VS58.33%，P>0.05）。
　　3.多藥耐藥的 KPn的 MICCIP-b較浮游菌狀態(tài)的肺炎克雷伯對環(huán)丙沙星的MICCIP增加2-8倍，環(huán)丙沙星聯(lián)用黃連素（分別聯(lián)用256、512μg/ml的黃連素）后，對肺炎克雷伯的MICCIP-b無影響。
　　4.環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對多藥耐藥的 KPn生物膜的作用都以抑

6、制為主。在相同的培養(yǎng)時間（相同的生物膜形成階段），隨著單用環(huán)丙沙星濃度的升高，對KPn生物膜的抑制作用越顯著（P<0.05），但聯(lián)合黃連素（256μg/ml或512μg/ml）后，與單用環(huán)丙沙星相比，對多藥耐藥的KPn生物膜抑制率的影響無差別（P>0.05）。
　　5.環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素對非成熟階段的 KPn生物膜（培養(yǎng)4h、10h）生長的抑制作用比抑制成熟的Kpn的生物膜（培養(yǎng)時間18 h）的作用顯著（P<0.05）；對非

7、成熟階段的KPn生物膜生物膜表面活菌的抑制作用（活菌比例0.43%）較成熟的Kpn的生物膜（活菌比例3.87%）的作用顯著(P<0.05)。
　　6.環(huán)丙沙星組CLSM的平均熒光量（30.697Am x cm2）、環(huán)丙沙星聯(lián)合黃連素組的平均熒光量（21.300Am x cm2）均較陽性對照組（不含藥物組）的熒光強度（60.869Am x cm2）低（30.697Am x cm2VS60.869Am x cm2，P<0.05;21.

8、300Am x cm2VS60.869Am x cm2,P<0.01）;但環(huán)丙沙星單用或聯(lián)用黃連素組間的平均熒光量之間無顯著差異（30.697Am x cm2VS21.300Am x cm2，P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　單用環(huán)丙沙星或聯(lián)用黃連素均明顯抑制KPn，降低耐藥或敏感KPn對環(huán)丙沙星的 MIC，主要抑制游離狀態(tài) KPn；單用環(huán)丙沙星或聯(lián)用黃連素都對 KPn生物膜有抑制作用，抑制效果與藥物的濃度和膜的成熟程度有關(guān)