黃連素對燒傷創(chuàng)面銅綠假單胞菌生物膜干預(yù)試驗及自制中藥臨床應(yīng)用觀察.pdf

1、目的:通過建立銅綠假單胞菌體外生物模型，對比黃連素和對照組細菌生物膜形態(tài)和數(shù)量，研究黃連素對銅綠假單胞菌生物膜的影響，通過對自制中藥三黃燒傷靈的動物及臨床使用觀察，研究三黃燒傷靈的臨床使用效果。
　　方法:(1)收集燒傷科2014年1-6月微生物送檢陽性標本，選取氧化酶試紙陽性菌株，經(jīng)VITEK2快速細菌自動鑒定儀鑒定為銅綠假單胞菌，質(zhì)控菌株ATCC27853。藥敏試驗采用K-B紙片擴散法，判斷結(jié)果按照CLSI最新折點標準判定為耐

2、藥的作為研究菌株。(2)應(yīng)用阿利新藍-剛果紅染色初篩銅綠假單胞菌定性細菌生物膜。(3)將傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法改用聚氯乙烯薄片載體引導(dǎo)發(fā)培養(yǎng)，通過掃描電鏡觀察培養(yǎng)1天，3天，5天，7天的細胞生物膜形態(tài)，確定細胞生物膜的成熟時間。(4)利用結(jié)晶紫染色進行生物膜半定量監(jiān)測，在L-B肉湯的96孔板（孔板中已加引導(dǎo)片）中培養(yǎng)，培養(yǎng)成熟后取出引導(dǎo)片，酶標儀490nm波長測定洗脫液的OD值。(5)用微量稀釋法測定黃連素對臨床銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度(M

3、IC)值，對比實驗組和空白組掃描電鏡的細菌生物膜形態(tài)，并用瓊脂平板法生物膜內(nèi)活菌計數(shù)。(6)通過運用三黃燒傷靈治療大鼠深二度燒傷創(chuàng)面，觀察該藥對創(chuàng)面愈合情況的影響。(7)通過三黃燒傷靈臨床實驗觀察對創(chuàng)面愈合情況，分析三黃燒傷靈作用于臨床患者燒傷創(chuàng)面的效果。
　　結(jié)果:(1)送檢標本中陽性細菌耐藥檢出率為76.7％(115/150)。(2)阿利新藍-剛果紅染色初篩產(chǎn)生細菌生物膜陽性率為83.5％(96/115)。(3)電鏡掃描1-3

4、天細菌細胞生物膜形成，3天形成早期生物膜，5天形成速度變緩慢，7天形成成熟的細菌生物膜。(4)1d時，細菌量增多，OD值為0.45±0.53;持續(xù)培養(yǎng)3d時，細菌菌落數(shù)培養(yǎng)觀察數(shù)量明顯增多，OD值為1.21±0.49，BF逐步開始形成;持續(xù)培養(yǎng)5d時，電鏡觀察BF的形成數(shù)量成聚集模式增多，OD值2.07±0.47;持續(xù)培養(yǎng)到7d時， BF的形成數(shù)量電鏡觀察結(jié)果和第5d的量觀察對比肉眼區(qū)分區(qū)別相差不大， OD值為2.12±0.35，而對照

5、菌株在對應(yīng)時間測得結(jié)果分別為:0.43±0.36，0.52±0.38，0.49±0.52，0.53±0.39，實驗菌株OD值相對較高(5)黃連素對銅綠假單胞菌的生物膜的MIC為(8692ug/ml)，2MIC(17384ug/ml)對細菌生物膜有抑制作用，黃連素與空白對照生物膜的細菌計數(shù)有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(6)黃燒傷靈促進大鼠深二度創(chuàng)面的愈合。(7)通過三黃燒傷靈的臨床使用觀察，三黃燒傷靈對控制燒創(chuàng)面感染，提高創(chuàng)面肉芽融合率

6、，加快創(chuàng)面愈合有顯著功效。
　　通過三黃燒傷靈的臨床使用觀察，三黃燒傷靈對控制燒創(chuàng)面感染，提高創(chuàng)面肉芽融合率，加快創(chuàng)面愈合有顯著功效。
　　結(jié)論:多重耐藥性銅綠假單胞菌黏附于組織和生物材料表面，可以大量形成細菌生物膜并聚集，并逐步形成防滲透屏障，使銅綠假單胞菌的耐藥程度加強。在細菌生物膜完全形成之前（7天），通過黃連素對銅綠假單胞菌生物膜抑制作用的研究，黃連素是一種有效的延緩細菌生物膜形成的生物堿。三黃燒傷靈作用于臨床，可有