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文檔簡介
1、目的:研究黃連素對乏氧人前列腺癌細胞株LNCaP體內(nèi)及體外的放射增敏作用并探討其可能的作用機制。
方法:體內(nèi):應(yīng)用MTT方法檢測黃連素對LNCaP細胞生存率的影響;通過細胞克隆形成實驗,觀察不同濃度黃連素對LNCaP細胞放療敏感性的影響;采用流式細胞儀,檢測細胞凋亡率,免疫印跡法(WB)、免疫熒光法檢測細胞內(nèi)HIF-1α、VEGF蛋白的表達變化。體外:建立前列腺癌LNCaP細胞裸鼠移植瘤模型;移植瘤平均體積增至約125mm3時
2、,采用隨機數(shù)字表法將裸鼠24只分4組:對照組、單純藥物組(5mg/kg黃連素)、單純照射組(8Gy)、藥物+照射組(5mg/kg黃連素+8Gy)。36天后測量移植瘤體積,計算腫瘤體積抑制率,并對移植瘤標本進行Western blot檢測移植瘤組織中HIF-1α及VEGF蛋白的表達。
結(jié)果:體內(nèi):黃連素對LNCaP細胞有一定的毒性作用,并顯現(xiàn)劑量-效應(yīng)和時間-效應(yīng)關(guān)系,24h時黃連素的IC50為220.36μM。經(jīng)克隆形成實驗證
3、實,黃連素對LNCaP細胞有明顯的增敏作用,并且隨著黃連素濃度的增加,放療敏感性增加,30μM、50μM的黃連素對LNCaP細胞的放射增敏比(SER)分別為:1.40、1.77。藥物聯(lián)合照射組的乏氧細胞凋亡率較單純照射組的乏氧細胞凋亡率明顯增加,并且隨著藥物濃度的增加,凋亡率增加;WB和免疫熒光結(jié)果均顯示藥物聯(lián)合照射組較對照組、單純藥物組和單純照射組的HIF-1α、VEGF蛋白的表達明顯降低,與單純照射組比較,有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05
4、)。體外:藥物+照射組裸鼠移植瘤體積為(505.0±110.7) mm3,顯著低于單純藥物組(1384.2±182.0)mm3和單純照射組(1119.7±248.2) mm3(p<0.05),其抑制率達74.3%。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),藥物+照射組移植瘤組織中HIF-1α、VEGF蛋白表達水平較單純照射組明顯降低。
結(jié)論:黃連素對乏氧人前列腺癌細胞株LNCaP細胞體內(nèi)及體外均有放射增敏作用,其機制可能與抑制HIF-
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