馬鈴薯單倍體誘導(dǎo)培養(yǎng).pdf

1、單倍體育種作為一種高效的育種方法，在馬鈴薯育種中已越來越受到關(guān)注。馬鈴薯單倍體產(chǎn)生的各種途徑中，花藥培養(yǎng)是目前獲得單倍體最有效、應(yīng)用最廣泛的方法。但由于影響花藥培養(yǎng)的因素很多，如材料基因型、接種時期、培養(yǎng)方式、培養(yǎng)基成分、預(yù)處理條件、培養(yǎng)條件等等，限制了該項技術(shù)的進(jìn)一步應(yīng)用。因此馬鈴薯花藥培養(yǎng)技術(shù)體系仍是制約馬鈴薯單倍體育種的主要因素。 本試驗(yàn)對20個基因型的馬鈴薯花藥進(jìn)行培養(yǎng)，分析消毒時間、基因型、預(yù)處理條件，尤其是誘導(dǎo)培養(yǎng)基

2、和分化培養(yǎng)基的成分對提高馬鈴薯單倍體植株再生頻率的影響。 本試驗(yàn)得到以下主要結(jié)論： 1.綜合消毒效果和花藥受損情況，認(rèn)為最佳的消毒方法為：用70％酒精表面消毒30s后，用0.1％HgCl2+1-2滴吐溫-80消毒8min。 2.馬鈴薯花蕾的顏色和大小可作為判斷小孢子發(fā)育時期的一個簡便而可靠的指標(biāo)，多數(shù)材料的花蕾綠色、大小約為5.0～6.0mm時小孢子處于單核靠邊期。 3.在供試的20個基因型中，不同基因型

3、的材料誘導(dǎo)率差異很大。康932-2的花藥誘導(dǎo)率最高，為4.17％，而YA03-5、YA03-7、洋人洋等基因型無愈傷組織或胚狀體形成；只有S21、鄂馬鈴薯5號、康932-2、7692-76這四種基因型誘導(dǎo)出花藥植株，其它基因型無花藥植株生成。 4.利用311-A最優(yōu)回歸設(shè)計，以誘導(dǎo)率(Y)為因變量，2,4-D(X1)、KT(x2)、糖(X3)水平編碼為自變量建立回歸方程：Y=3.9299+0.0272X1+0.3382X2-0.

4、0232X3-0.3025X12+0.1275X22.0.9487X32+0.0913X1X2+0.0948X1X3-0.5593X2X3。對該回歸方程進(jìn)行主效因子及其互作效應(yīng)分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)2,4-D、KT、糖的水平編碼值分別為0.2545、2、-0.5891時，即它們的濃度分別為0.5636 mg/L、1.0000mg/L、28.2187 g/L時，誘導(dǎo)率可達(dá)到5.4797％。 5.接種前4℃低溫預(yù)處理和接種后的短期35℃熱激處

5、理均有利于提高花藥誘導(dǎo)率。兩種預(yù)處理方法都以48h為最佳。 6.培養(yǎng)基中添加適量活性炭有助于減輕花藥的褐化程度，提高花藥誘導(dǎo)率，但對不同基因型的花藥有差異。另外，在培養(yǎng)基中添加5％的馬鈴薯提取液也有利于馬鈴薯花藥誘導(dǎo)。 7.不同濃度配比的NAA、6-BA、KT在馬鈴薯愈傷組織分化中有重要的作用。NAA濃度高愈傷組織只分化出根，6-BA和KT濃度高時，愈傷組織褐化嚴(yán)重。MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+K