體外單倍體誘導(dǎo)和單倍體育種

1、體外單倍體誘導(dǎo)與單倍體育種,體外單倍體誘導(dǎo)通常是指利用離體培養(yǎng)花藥或小孢子的方法，誘導(dǎo)形成單倍體植株。單倍體育種是指將具有單套染色體的單倍體植物，經(jīng)人工染色體加倍，使其成為純合二倍體，從中篩選出優(yōu)良個(gè)體，直接繁育成新品種；或選出具有單一優(yōu)良性狀的個(gè)體，作為雜交育種的原始材料[1]。,,,,,,,,,,1,2,3,4,5,6,7,8,9,花柄,花托,子房,花萼,花瓣,花柱,柱頭,花藥,花絲,,雄蕊,,,,雌蕊,（花冠）,花粉植株形態(tài)發(fā)生

2、的方式,愈傷組織型：離體培養(yǎng)的花粉粒先形成愈傷組織，再分化為單倍體植株水稻花藥的培養(yǎng),接種在平板上的水稻花藥,部分花藥產(chǎn)生愈傷組織,類胚體型：離體培養(yǎng)的花粉粒分裂后，以胚狀體的形式釋放出來，然后發(fā)育成植物體,部分花藥通過胚狀體途徑形成小植株,煙草花藥培養(yǎng),通過胚狀體途徑再生形成小植株,煙草花藥培養(yǎng),13.1 植物小孢子發(fā)育過程,第一期，小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂形成四分體。四分體的周圍包裹著一層厚的胼胝質(zhì)，隨著胼胝質(zhì)的分解四個(gè)小孢子便分離開

3、來；第二期，單個(gè)小孢子繼續(xù)發(fā)育。進(jìn)行第一次花粉細(xì)胞有絲分裂，分裂是不對(duì)稱的，這種類型的花粉粒稱為A型；第三期，小孢子發(fā)育形成成熟的花粉粒。標(biāo)志：細(xì)胞中明顯出現(xiàn)兩個(gè)核。,花藥培養(yǎng):將花粉發(fā)育至一定階段的花藥培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)其花粉粒改變發(fā)育進(jìn)程，形成花粉胚或愈傷組織，進(jìn)而分化成苗的過程[2]。（器官培養(yǎng)） 花粉培養(yǎng)(小孢子培養(yǎng))：將發(fā)育至一定階段花粉從花藥中分離出來成為分散或游離狀態(tài)，花粉脫分化后再生成苗。（細(xì)胞培養(yǎng)）,

4、13.2 花藥和花粉培養(yǎng)：,歷史：,Guha和Maheshwari （1964） 曼陀羅花藥培養(yǎng)Nitsch 和 Norreel (1973) 煙草花粉培養(yǎng)（游離小孢子培養(yǎng)） Chu（1973）小麥花粉培養(yǎng) （早期花藥培養(yǎng)主要依靠小孢子的自然胚胎發(fā)生產(chǎn)生單倍體，能自發(fā)形成胚胎發(fā)生的基因頻率較低，效率極低）80年代后期到90年代期間，花培技術(shù)迅速發(fā)展。許多作物小孢子培養(yǎng)已經(jīng)成功。十字花科、麥類、水稻、玉米等[3]。90年代

5、，一些先前被認(rèn)為是不易進(jìn)行小孢子培養(yǎng)的基因型也相繼成功Konzak (1999) 。,花藥和花粉培養(yǎng)：指在合成培養(yǎng)基上，改變花粉的發(fā)育途徑，使其不形成配子，而像體細(xì)胞一樣進(jìn)行分裂、分化、最終發(fā)育成完整植株。該發(fā)育途徑被稱為“花粉孢子體發(fā)育途徑”或“雄核發(fā)育”[4]。兩者的異同點(diǎn)培養(yǎng)目的相同，均獲得小孢子植株?；ㄋ幣囵B(yǎng)屬于器官培養(yǎng)；而花粉培養(yǎng)屬于細(xì)胞培養(yǎng)。花粉培養(yǎng)沒有藥壁組織干擾；可計(jì)數(shù)小孢子產(chǎn)胚率；可觀察雄核發(fā)育的全過程；單倍體

6、產(chǎn)量高。但技術(shù)更復(fù)雜。,2. 花藥或花粉培養(yǎng)的意義：,2.1 作物育種（1）縮短育種周期：常規(guī)育種需4-6年獲得純系，而小孢子培養(yǎng)僅需一年。,例子：二倍體供體植株基因型為AaBb，若要從后代中選擇基因?yàn)锳Abb的純合單株常規(guī)方法： AAbb出現(xiàn)的概率為1/16，并且不能將AAbb與Aabb、aAbb區(qū)分開。,（2）提高了目標(biāo)基因型的選擇效率,ABaBAbabABAABBAaBBAABbAaBbaBaABBa

7、aBBaABbaaBbAbAabBAabBAAbbAabbabaAbBaabBaAbbaabb,例子：二倍體供體植株基因型為AaBb，若要從后代中選擇基因?yàn)锳Abb的純合單株單倍體方法： AAbb出現(xiàn)的概率為1/4。,（2）提高了目標(biāo)基因型的選擇效率,植株不受顯隱性的影響，在誘變育種中能在當(dāng)代及時(shí)獲得突變個(gè)體，加倍后成為穩(wěn)定的純系。,（3）誘變育種中的作用,2.2 物種進(jìn)化研究 可探索親本染色體組的構(gòu)成

8、。分析單倍體植物減數(shù)分裂時(shí)，形成二價(jià)體的數(shù)目和形狀，能確定染色體組內(nèi)是否存在同源染色體。 2.3 遺傳分析 單倍體植株中基因不受顯隱性的影響，每一個(gè)基因的作用均能表現(xiàn)出來。能用來研究基因的性質(zhì)及其作用。還可用于基因的劑量效應(yīng)分析[5]。2.4 構(gòu)建連鎖圖譜 雙單倍體（DH）群體是永久性群體，能有效地用于遺傳圖譜的構(gòu)建2.5 用于遺傳轉(zhuǎn)化 能直接表達(dá)外源基因，不受顯隱性影響。,3. 花粉孢子體發(fā)育途徑

9、 （雄核發(fā)育）,3.1 花粉發(fā)育的階段,花粉離體培養(yǎng)時(shí)，雄核發(fā)育最適宜的時(shí)期一般是第一次有絲分裂或之前。,3.2 雄核發(fā)育途徑,1、A途徑 小孢子第一次有絲分裂為均等分裂，形成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞 （1）A-V途徑 由營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞重復(fù)分裂形成單倍體 （2）A-G途徑 由生殖細(xì)胞重復(fù)分裂形成單倍體 （3）A-VG途徑（E途徑） 由營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞各自獨(dú)立分裂，共同形成單倍體 （4）C途徑

10、 營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞通過核融合，形成多倍體植株2、B途徑 小孢子第一次有絲分裂為均等分裂，形成大小相近的兩個(gè)細(xì)胞。然后由這兩細(xì)胞邊續(xù)分裂形成單倍體植株，或者核融合形成多倍體植株,1、雄核發(fā)育與P花粉的形成P-花粉：具胚胎發(fā)生潛能的花粉。也稱小花粉（S-花粉）或不染色花粉（NS-花粉）2、雄核發(fā)育與饑餓處理饑餓處理改變了小孢子的配子體發(fā)育方向，啟動(dòng)雄核發(fā)育。,3.3 雄核發(fā)育啟動(dòng)機(jī)理,,1、胚狀體發(fā)育途徑

11、 小孢子經(jīng)歷胚發(fā)生的各個(gè)階段，最后子葉展開，形成花粉植株。2、愈傷組織發(fā)育途徑 小孢子分裂數(shù)次形成愈傷，再分化形成花粉植株。此途徑產(chǎn)生的植株會(huì)出現(xiàn)變異且倍性復(fù)雜[6]。,,3.4 花粉植株形態(tài)發(fā)生方式,4 花藥和花粉培養(yǎng)方法,4.1 花藥培養(yǎng),1、取材 鏡檢，根據(jù)花粉的發(fā)育時(shí)期，選取大小適宜的花蕾。 2、消毒 70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸鈉溶液中浸泡10-2

12、0min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，無菌水沖洗3-5次。 3、培養(yǎng) 固體或液體培養(yǎng)基均可。先進(jìn)行脫分化培養(yǎng)，至小孢子大量分裂形成胚或愈傷，并突破花藥壁表面，形成突出物（2-3周）；后轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，形成小植株[7]。,4.2 花粉培養(yǎng),(一)花粉的分離與純化 1、自然散落法(漂浮培養(yǎng)散落小孢子收集法) 將花藥接種在預(yù)處理液或液體培養(yǎng)基上，待花粉自動(dòng)散落后，收集培養(yǎng)。2、擠壓法 在燒杯

13、或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。3、機(jī)械游離 （1）磁攪拌法 用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來；（2）超速旋切法 通過攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來（此法應(yīng)用最廣）。4、小孢子純化 對(duì)上述方法獲得的小孢子混合物進(jìn)行分級(jí)過篩、梯度離心處理純化小孢子,梯度離心前（小孢子形態(tài)、活力不一致）,30%蔗糖梯度離心后（獲得均一的小孢子群體）,(二)花粉培

14、養(yǎng)方式 1、平板培養(yǎng) 花粉置瓊脂固化培養(yǎng)基上培養(yǎng)。2、液體培養(yǎng) 花粉懸浮在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，需震蕩，以利通氣。3、雙層培養(yǎng) 花粉置固體-液體雙層培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)基制作方法：先鋪一層瓊脂固體培養(yǎng)基，凝固后，在表面加入少量液體培養(yǎng)基。 4、看護(hù)培養(yǎng) 利用花藥或花藥愈傷組織釋放出的活性物質(zhì)促進(jìn)花粉小孢子發(fā)育。5、微室培養(yǎng) 利用小的蓋玻片和凹穴載玻片形成微室進(jìn)行花粉培養(yǎng)6

15、、條件培養(yǎng)基培養(yǎng) 利用培養(yǎng)過花藥的液體培養(yǎng)基或含失活花藥提取物的培養(yǎng)基上培養(yǎng)?；ㄋ帡l件培養(yǎng)基、子房條件培養(yǎng)等。,看護(hù)培養(yǎng)圖解,其操作方法是在固定培養(yǎng)基上置入一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織，再在愈傷組織上放一小片濾紙，待濾紙濕潤(rùn)后將細(xì)胞接種于濾紙上。當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)出微小細(xì)胞團(tuán)以后，將其直接轉(zhuǎn)移至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長(zhǎng)。,一、倍性鑒定,1、染色體直接計(jì)數(shù)法 通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進(jìn)行制片，直接計(jì)數(shù)染色體數(shù)目

16、。2、間接鑒定（1）掃描細(xì)胞光度儀鑒定（流式細(xì)胞儀） 主要測(cè)定葉片單個(gè)細(xì)胞中DNA的含量確定細(xì)胞的倍性，材料的使用量可少到1cm2。（2）細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定法 葉片保衛(wèi)細(xì)胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及保衛(wèi)細(xì)胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關(guān)性。（3）植株形態(tài)學(xué)鑒定法 單倍體植株瘦弱，葉片窄小，花小柱頭長(zhǎng)，花粉粒小，不結(jié)實(shí)[8]。,4.3 單倍體植株鑒定和染色體加倍,（4）雜交鑒定法自交或測(cè)交鑒定

17、，看后代分離情況確定二倍體植株是來自小孢子還是體細(xì)胞。（5）分子標(biāo)記鑒定包括生化標(biāo)記（如同工酶標(biāo)記）和分子標(biāo)記（如RFLP、RAPD、AFLP等）,4.3 單倍體植株鑒定和染色體加倍,二、染色體加倍,（一）莖段培養(yǎng)將單倍體植株的莖段進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷組織形成。由于單倍體愈傷組織在培養(yǎng)過程中會(huì)有一定頻率的核內(nèi)有絲分裂，從而形成二倍體細(xì)胞，分化出純合的二倍體植株。,4.3 單倍體植株鑒定和染色體加倍,二、染色體加倍,（二）化學(xué)試

18、劑誘變有秋水仙素、Oryzalin、trifluralin、APM等。1、秋水仙素誘導(dǎo)（1）浸泡法無菌條件下以一定濃度的秋水仙素浸泡再生小植株，再轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。（2）生長(zhǎng)錐處理 秋水仙素水溶液直接涂抹生長(zhǎng)點(diǎn)（頂芽或腋芽）。（3）培養(yǎng)基處理 將單倍體植株和任何一部分作為外植體，種植在附加一定濃度和秋水仙素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，轉(zhuǎn)入無秋水仙素的相同培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體。2、除草劑誘導(dǎo)

19、（毒性小，引起植株的變異幾率?。?4.3 單倍體植株鑒定和染色體加倍,花藥和花粉培養(yǎng)基本流程：,,5. 影響雄核發(fā)育和花粉花藥培養(yǎng)的因素,（一）基因型 植物基因型是影響雄核發(fā)育的最重要的因素之一。同一物種中的不同基因型對(duì)小孢子離體誘導(dǎo)反應(yīng)差異較大。 如在水稻中，秈稻花粉培養(yǎng)力遠(yuǎn)低于糯稻。,（二）供體植株生長(zhǎng)條件和生理狀態(tài)1、植株生長(zhǎng)條件 光溫等因素均能影響花藥培養(yǎng)力。一般處于適宜生長(zhǎng)

20、條件（如溫室中）較好。但物種間存在差異。2、植株生長(zhǎng)時(shí)期 一般是開花始期優(yōu)于開花末期。3、P花粉的頻率 不同溫度、日照時(shí)數(shù)、氮饑餓及生長(zhǎng)物質(zhì)處理提高P花粉的數(shù)量,（三）花粉發(fā)育時(shí)期小孢子發(fā)育時(shí)期對(duì)誘導(dǎo)雄核發(fā)育非常重要。,四分體: 醋酸洋紅染色,四分體: Alexander’s 染色,單核期,雙核期,成熟花粉粒,處于不同發(fā)育時(shí)期的煙草小孢子,單核晚期,?液泡,第一次有絲分裂后期,雙核早期,雙核中期,?

21、生殖核,?生殖核,營(yíng)養(yǎng)核?,（四）預(yù)處理 預(yù)處理是小孢子培養(yǎng)成功的前提條件 預(yù)處理目的：是改變小孢子的發(fā)育方向，使盡可能多的小孢子從配子體發(fā)育途徑轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育途徑（即成為具胚胎發(fā)生潛力的小孢子）。適當(dāng)?shù)念A(yù)處理能使綠苗產(chǎn)量大量增加。 預(yù)處理方法：主要是對(duì)花藥進(jìn)行適度的逆境處理，包括低溫、高溫、化學(xué)物質(zhì)、離心、射線等[9]。,1、高低溫處理低溫預(yù)處理：指在接種之前將材料用0℃以上低溫處理一段時(shí)間后再接種。應(yīng)用較多。處理溫度

22、一般在1-14℃，時(shí)間從幾小時(shí)至幾十天不等。不同作物所用的預(yù)處理溫度及時(shí)間差異較大。不同的處理溫度需要不同的時(shí)間。 例子:小麥穗子培養(yǎng)前4℃預(yù)處理幾天，花藥培養(yǎng)效率顯著提高。 十字花科未經(jīng)低溫預(yù)處理的花蕾，每花藥產(chǎn)胚數(shù)為4.39個(gè)，6-9℃處理1天，產(chǎn)胚數(shù)提高到61.4個(gè)，預(yù)處理4天后，胚狀體產(chǎn)量降為10.47個(gè)[10]。,預(yù)處理方法：,2、化學(xué)物質(zhì)處理,包括高糖、甘露醇、秋水仙素、乙烯利等進(jìn)行處理。甘露醇僅能維持滲透壓，

23、不能提供碳源，其主要原理是造成小孢子營(yíng)養(yǎng)饑餓，從而使小孢子去分化。,3、其它,包括γ射線、離心、磁場(chǎng)等。,（五）培養(yǎng)基,1.基本培養(yǎng)基 主要為N6和MS培養(yǎng)基。在此基礎(chǔ)上發(fā)展出一些其它的培養(yǎng)基。如H培養(yǎng)基（適于煙草）、C17培養(yǎng)基（適于小麥）、馬鈴署-Ⅱ培養(yǎng)基（適于馬鈴署）,2.碳源 包括蔗糖、麥芽糖、纖維二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最適的碳源種類及濃度的所差異。一般認(rèn)為單子葉植物比雙子葉植

24、物需糖的濃度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麥類作物中，麥芽糖似乎為最好的碳源。,3、激素4、氨基酸5、活性碳6、pH,（六）培養(yǎng)條件,1、溫度 物種間有差異2、光照 3、植板密度 植板密度與花培效率有很大的相關(guān)性。5×103到2×104／ml密度均能有效培養(yǎng)。一般來說，足夠數(shù)量的、但相對(duì)低密度的小孢子濃度有利于小孢子競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)、氧氣、細(xì)胞分裂的空間，從則有利于胚狀體發(fā)生。,03,02,01,

25、縮短育種周期，加快育種進(jìn)程,04,克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,提高誘變育種效率,合成育種新材料，豐富遺傳資源,,,,,單倍體育種的優(yōu)點(diǎn),有利變異少，須大量處理材料,,誘變的方向和性質(zhì)不能控制,,改良數(shù)量性狀效果較差,,單倍體育種的缺點(diǎn),1,2,3,4,5,6,7,玉米單倍體育種技術(shù),大麥單倍體育種技術(shù),馬鈴薯雙單倍體育種技術(shù),茄子花藥培養(yǎng)技術(shù),煙草單倍體育種技術(shù),水稻單倍體育種技術(shù),甜（辣）椒花藥培養(yǎng)技術(shù),單倍體育種技術(shù)應(yīng)用,玉米單倍

26、體育種技術(shù),利用單倍體技術(shù)可縮短培育優(yōu)勢(shì)雜種時(shí)間, 克服遠(yuǎn)緣雜交產(chǎn)生的不親合性、提高誘變育種的效率、合成玉米育種新材料。單倍體技術(shù)培育玉米自交系在美國(guó)正被玉米商業(yè)育種家廣泛地利用。在我國(guó), 最早開展此項(xiàng)研究的中國(guó)科學(xué)院遺傳研究所, 通過采用孤雌生殖技術(shù), 在不到20年的時(shí)間里已育成3000多個(gè)孤雌生殖純系, 其中綜合性狀優(yōu)良或個(gè)別性狀突出, 可直接或間接用于育種的近350個(gè),&

27、#160;選出多個(gè)優(yōu)良組合參加省級(jí)和國(guó)家級(jí)區(qū)試。遺單6號(hào)、科玉10 號(hào)、秦單5號(hào)已通過審定, 并在生產(chǎn)上進(jìn)行推廣[11]。,獲得玉米單倍體技術(shù),1 自然發(fā)生的單倍體  生殖過程異常所引起的孤雌或孤雄生殖而來的玉米單倍體,自然發(fā)生的單倍體的頻率極低,僅為10-5～10- 8。由于單倍體高度不育,其植株和它的組織器官等都比它們的二倍體弱小,所以自然界中存在的單倍體很少。2

28、60;孤雌生殖  誘導(dǎo)玉米孤雌生殖的方法很多。利用異種花粉授粉, 刺激未受精卵發(fā)育引起孤雌生殖產(chǎn)生單倍體；利用紫外線處理的玉米成熟花粉粒給正常植株授粉, 讓已無授精能力的花粉去刺激未受精的卵細(xì)胞單性發(fā)育成單倍體的胚；利用甲苯胺藍(lán)等化學(xué)藥劑處理花粉產(chǎn)生單倍體?；瘜W(xué)藥物誘導(dǎo)孤雌生殖常易產(chǎn)生一些影響生理生化和形態(tài)上的畸變, 其可靠性常受到懷疑。,3 花粉、花藥培養(yǎng) 

29、 用花藥、花粉組織培養(yǎng)技術(shù)獲得單倍體。在獲得單倍體的同時(shí)，還常常出現(xiàn)已自然加倍了的二倍體和雙倍體。4 傳粉玉米子房誘導(dǎo)單倍體  利用花粉的生物刺激作用來誘導(dǎo)傳粉的玉米子房產(chǎn)生單倍體植株, 可建立起高效、穩(wěn)定的玉米單倍體誘導(dǎo)體系。當(dāng)授粉時(shí)間控制在12～22 h, 授粉子房均有可能誘導(dǎo)出單倍體植株，春秋季誘導(dǎo)單倍體植株的效果比夏季好[12]。,5 遠(yuǎn)緣雜交單親染

30、色體消失  在遠(yuǎn)緣雜交中, 可能由于雙親體細(xì)胞分裂周期的不同步, 導(dǎo)致某一親本染色體的丟失, 從而引起單倍體的發(fā)生。6 輻射誘導(dǎo)  用射線照射花或父本花粉經(jīng)X射線處理后, 給去雄的母本授粉, 以影響授精, 誘導(dǎo)單性生殖產(chǎn)生單倍體。,7 利用高頻誘導(dǎo)單倍體材料  美國(guó)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)高頻誘導(dǎo)單倍體

31、的材料并定名為Stock6, 為早熟、白色、粉質(zhì)、硬粒型的玉米, 后又經(jīng)過兩次回交和兩次自交導(dǎo)入了控制子粒性狀和植株性狀的兩種顯性標(biāo)記基因。它具有兩個(gè)標(biāo)記性狀: 子粒有斑紋、成株葉片和葉鞘呈紫色, 均是由互補(bǔ)基因控制。Stock6誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的原理已經(jīng)清楚, 雙授精過程中一個(gè)精子與極核結(jié)合, 而另一個(gè)精子不能與卵結(jié)合形成授精卵。在育種實(shí)踐中用作父本, 被誘導(dǎo)的育種試

32、材作母本, 大約有3%的單倍體胚。此外還有A358、ZMS、MKS、MHI 等一些單倍體誘導(dǎo)材料, 均能夠產(chǎn)生大約3%的單倍體胚。,玉米單倍體育種的前景,單倍體技術(shù)在玉米育種中的應(yīng)用前景十分誘人。不僅具有理論意義，還存在著巨大的生產(chǎn)潛力。首先對(duì)目標(biāo)誘導(dǎo)材料進(jìn)行重組與改良，使其積累足夠的有利基因位點(diǎn)，然后利用單倍體技術(shù)使優(yōu)良的基因快速純合，獲得性狀優(yōu)良的純系，這將會(huì)極大地發(fā)揮單倍體育種技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，極大提高玉米

33、育種的效率。未來的工作將以進(jìn)一步完善單倍體誘導(dǎo)體系、提高單倍體誘導(dǎo)率和提高單倍體加倍技術(shù)為重點(diǎn)研究方向。另外單倍體育種技術(shù)可以和品種設(shè)計(jì)、分子育種、轉(zhuǎn)基因技術(shù)等結(jié)合起來，使單倍體育種技術(shù)發(fā)揮更大作用。,單倍體育種研究的現(xiàn)狀,單倍體育種的研究，確實(shí)是取得了很好的成績(jī)。但是研究才剛剛開始，還有無數(shù)的難題依然令我們的專家束手無策。 例如：?jiǎn)伪扼w植株無法正常結(jié)實(shí)、單倍體育種在生產(chǎn)中成本高等等問題，依然無法得到很好的解決。

34、 還有，就是單倍體育種只局限與植物，而不能應(yīng)用于動(dòng)物體身上。這也是有待解決的問題。,參考文獻(xiàn),[1] 才卓,徐國(guó)良,劉向輝等.玉米單倍體誘導(dǎo)選系研究[J].玉米科學(xué), 2004,12(1):10- 11 .[2] 陳紹江, 宋同明. 利用高油分的花粉直感效應(yīng)鑒別玉米單倍體[J].作物學(xué)報(bào), 2003, 29(4): 587- 590 .[3] 杜娟, 母秋華, 賈玉鋒, 等. 利用橋接組合轉(zhuǎn)育的方法提高玉米花藥培

35、養(yǎng)誘導(dǎo)率的研究[J] . 玉米科學(xué), 1999, 7(3): 16- 18 .[4] 韓學(xué)莉, 唐祈林, 曹墨菊, 等. 用Stock6 雜交誘導(dǎo)的單倍體鑒定方法初探[J] . 玉米科學(xué), 2006, 14(1): 64- 66 .[5] 湯飛宇，王菲，王國(guó)英. 利用SSR 標(biāo)記檢測(cè)來源于玉米孤雌生殖的雙倍體[ J ]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（6）： 859 ～862.[6] 才卓，徐國(guó)良， CHANGMING-

36、TANG，等. 玉米單倍體育種研究進(jìn)展[ J ].玉米科學(xué)，2008，16（1）：1 ～ 5.,參考文獻(xiàn),[7] Blakeslee A F, et al. A haploid mutation in the jinson weed, datura stramonium[J]. Science, 1922, 55: 646- 647.[8] RandolphLF. Note on haploid frequencies[J].Mai

37、ze Genet. Coop. News Lett., 1938, 12: 12.[9] Guha S, Maheshwari S C. In vitro production of embryos fromanthers of Datura[J]. Nature, 1964, 204: 497.[10] Opatrn倀Z, Dostál J, Martinek V. AntherCultures ofMaize[J]

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